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求助 SSCP染色方法
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我要做SSCP，发现染色的方法有很多，比如1）1．固定。把胶卸下，做好起始记号，放入70%乙醇中在摇床上固定15min。固定好后乙醇回收（可以重复使用5次左右），蒸馏水洗两遍，每遍3min左右。若同时染两块胶固定和洗脱都要适当增加时间。 2．染色。染色液（200ml染色液含3.6%的NaOH4.2ml、20%AgNO33.6ml、氨水2ml）染色30min，同时染两块胶要适当增加时间，需40min左右。倒掉染色液，洗3遍，每遍3min，同时染两块胶要适当增加时间。 3．显色。显色液（200ml显色也包含1%柠檬酸钠1ml，甲醛100ul）至清晰。倒掉显色液，加蒸馏洗脱3次停显。 2）. 固定 采用10%乙酸进行固定。取450ml存水，加入冰醋酸50ml混合，倒入容器中放在摇床上固定30min；水洗三次，每次2min； 2. 染色 采用0.1%硝酸银染色，取0.4g硝酸银加入到400ml存水中，再加入甲醛500μl，轻摇25min（用黑布盖好）；水洗20s； 3. 显色 25%碳酸钠，取12.5g碳酸钠加入500ml纯水中(-20°冷却的)，加入甲醛500μl，Na2S2O3100μl(100mg/mL)； 4. 固定 10%乙酸固定，10min； 放入纯水中即可。 3） 固定 把胶卸下，做好起始记号，放入约80ml固定液（50ml无水乙醇，2.5ml冰乙酸，定容到500ml，冷藏）中在摇床上固定10min。 2. 染色 60ml染色液（0.75gAgNO3，溶入500ml水中，避光保存）+60µl甲醛， 染色6min。蒸馏水洗涤一次。 3 显色 60ml显色液（7.5g NaOH，溶于500ml水）+120µl甲醛，放到摇床上显色至条带清晰。倒掉显色液，加蒸馏停止显色 4）将PAG板用去离子水洗二次，浸入10%乙醇和0.5%冰醋酸溶液固定6min。用去离子水洗两次，再浸入0.2%AgNO3溶液中10min，用去离子水洗3-5次，然后浸入1.5%NaOH和0.4%甲醛溶液中显色7min。最后，用0.75%%NaCO3终止显色。 求助各位，哪种方法比较好啊！谢谢！！！ |
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