| 查看: 4068 | 回复: 11 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
哈皮果果金虫 (小有名气)
|
[求助]
求真菌菌悬液制作方法
|
||
| 立枯丝核菌除产生厚垣孢子外部产生其他孢子，那我如何制作菌悬液呢？顺便再问一下，菌悬液和菌丝悬浮液一样吗？如果用于给植物体接种的话应该用谁呢？谢谢大家~急急急！！！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 肿瘤研究 |
» 猜你喜欢
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有5人回复
-
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有18人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有4人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有5人回复
-
我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？
已经有4人回复
-
国自然评审意见
已经有15人回复
-
为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难
已经有13人回复
-
国自然面上复盘~欢迎讨论
已经有14人回复
-
系统查不到
已经有11人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 菌悬液CFU/ML与OD值之间怎么换算
已经有12人回复
- 求真核细胞吞噬蓝细菌最后演变成叶绿体的文献
已经有4人回复
- 好氧反硝化菌的菌悬液该采用何种方法测定细菌的浓度呢？请大家给些建议，灰常感谢啊
已经有6人回复
- 克隆提取质粒测序结果怎么跟大肠杆菌菌液测序结果序列比对差异很大啊？
已经有4人回复
- 关于毕赤酵母菌悬液的诱变！！！
已经有4人回复
- 真菌孢子悬浮液制作问题
已经有11人回复
- 大肠杆菌菌悬液如何配
已经有6人回复
- 紧急求助--关于霉菌接种、菌悬液制备相关问题
已经有11人回复
- 枯草芽孢杆菌 菌悬液打散 梯度稀释
已经有4人回复
- 制备真菌孢子悬浮液的问题——是固体好还是液体培养好？
已经有18人回复
- 怎样配制1X10^9cfu/ml沙门氏菌悬液？
已经有16人回复
- 如何利用比浊法制成1×104CFU／g 或 CFU／ml菌悬液，用到哪些东东
已经有3人回复
- 葡萄糖注射液无菌检查方法求助
已经有5人回复
- 用4%的多聚甲醛固定细菌的时候，细菌悬液和多聚甲醛溶液的体积比是多少？
已经有8人回复
- 消毒剂悬液定量杀菌试验中霉菌菌悬液制备问题
已经有5人回复
- 谁知道火车上能带液体的菌悬液么？
已经有17人回复
- 带有绿木霉的菌悬液如何进行酵母细胞计数
已经有8人回复
- 放线菌孢子悬浮液如何制备
已经有5人回复
- 【求助/交流】请问做植物提取物抑菌试验时如何配制一定浓度的细菌悬液
已经有6人回复
- 【求助/交流】菌悬液怎么保存？
已经有25人回复
- 【求助/交流】菌悬液在冰箱中保藏时间
已经有12人回复
哈皮果果
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1091.7
- 散金: 1
- 红花: 2
- 帖子: 150
- 在线: 75.4小时
- 虫号: 2116725
- 注册: 2012-11-09
- 性别: MM
- 专业: 植物病理学
3楼2013-05-23 14:44:36
2楼2013-05-23 13:59:32
志子
至尊木虫 (文坛精英)
- MicEPI: 5
- 应助: 2847 (讲师)
- 贵宾: 0.743
- 金币: 42457.7
- 散金: 3857
- 红花: 299
- 帖子: 21362
- 在线: 1136.8小时
- 虫号: 2471022
- 注册: 2013-05-19
- 专业: 高分子组装与超分子结构
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
不知何菌~~~ 真菌菌悬液的制备 1）白色念珠菌悬液的制备 1）取冻干菌种管，在无菌操作下打开，以毛细吸管吸加适量沙堡液体培养基于管中，轻柔吹吸数次，使菌种融化分散。取含 5.0 ml～10.0ml 沙堡液体培养基试管，滴入少许菌种悬液，置 37℃培养 18h～24h。用接种环取第 1 代培养的菌悬液，划线接种于沙堡琼脂培养基平板上，于 37℃ 培养 18h～24h。挑取上述第 2 代培养物中典型菌落，接种于沙堡琼脂斜面，于 37℃ 培养 18h～24h，即为第 3 代培养物。 2）取第3代～14代的沙堡琼脂培养基斜面新鲜培养物（18h～24h），用 5.0 ml 吸管吸取 3.0 ml～5.0ml 稀释液加入斜面试管内，反复吹吸，洗下菌苔。随后，用 5.0ml 吸管将洗液移至另一无菌试管中，用电动混合器混合20s，或在手掌上振敲 80次，以使白色念珠菌菌悬浮均匀。 3）菌悬液的含菌量和菌片制备按2.1.1.2 要求进行。 4）菌悬液保存在 4℃ 冰箱内备用。当天使用不得过夜。 5）怀疑有污染时，应以菌落形态、革兰染色与生化试验等法进行鉴定。菌落形态可直接用显微镜观察。菌体形态可在涂片后直接用高倍显微镜观察，也可用墨水阴地法染色（将菌与黑墨水在玻片上混匀，推成薄膜）后观察。 （2） 黑曲霉ATCC 16404 悬液或菌片的制备。 1) 在无菌操作下打开冻干菌种管，以毛细管吸取少量麦芽浸膏营养肉汤培养基加到菌种管中，轻轻吹吸，使菌种沉淀物融化分散。取少许沉淀物悬液加到含 5.0ml 麦芽浸膏营养肉汤培养基试管中，置 30℃±1℃ 培养 42h～48h。用接种环划线接种第 1 代培养物于 MEA 培养基平板，置 30℃±1℃ 培养箱中培养 42h～48h。取平板培养物中的典型菌落，接种于麦芽浸膏营养肉汤培养基，置 30℃±1℃培养箱中培养 42h～48h，即为第3代培养物。 2) 用10.0ml 吸管吸取5.0 ml～10.0ml 第 3 代培养物，接种罗氏瓶，并摇动使菌液布满 MEA 培养基表面，然后将多余肉汤培养物液体吸出，置 30℃±1℃ 培养 42h～48h。 3) 向罗氏瓶培养物中加入5.0 ml～10.0ml 0.05%（V/V）吐温 80 生理盐水溶液, 刮洗黑曲霉分生孢子于溶液中，将孢子悬液移入装有玻璃珠的三角瓶中，轻轻振摇 1min 后,滤过除去菌丝。滤过后，显微镜下（400 倍）观察是否存在菌丝，若悬液中有菌丝存在，可经 5000 r/min～6000 r/min，离心 20min。再次在显微镜下（400 倍）观察，若悬液中仍有菌丝存在，须再离心。 4) 黑曲霉分生孢子悬液在 2℃～8℃ 储存不能超过 2 d，使用前，混合均匀，在显微镜下（400 倍）观察是否有孢子出芽，若有孢子出芽，则弃之不用。 5) 使用时，可用稀释液适当稀释。 6) 制备染菌样片时染菌方法为滴染法,每片加菌悬液10μl。染菌后，置 37℃ 培养箱内烤干(约 30min)，或置室温下自然阴干后再使用。 7) 回收菌数应达5×`10^5`cfu/片～5×`10^6`cfu/片，可依试验要求确定。 生孢梭菌菌悬液制备 其实无菌方法验证中的菌悬液的制备也是依中国药典（2005年版二部）附录XI H无菌检查法中“培养基灵敏度检查”项下的方法，制备成小于100 CFU/ml的对照用菌液。所以无论你做什么，菌悬液的制备方法都是一样的。 具体方法就是，先把生孢梭菌在硫乙醇中培养24小时，然后吸取1毫升培养液用生理盐水进行10倍稀释，我的经验是，稀释到10的-7次方就是在100cfu以下了（这个你得自己多做几次平行实验或验证实验，看到底稀释到多少倍。最初不好把握的时候可以同时培养几个临近的梯度），然后取至少200ml的硫乙醇酸盐培养基到试管里（要求无菌），然后接种1ml制备好的菌悬液到硫乙醇试管里，在32.5度下培养18h，然后开始计数。 生孢梭菌在液体的硫乙醇里会长成梭子一样的单个菌落，这时拿的时候千万不要震动，然后开始计数（一个单独的“梭子”计一个菌落）。 如果培养时间太长会产生浑浊，不便于计数。如果震动试管也会浑浊。硫乙醇的量尽量大一点，这样便于计数。 |
4楼2013-05-23 23:29:37
5楼2013-05-25 10:56:22
投票: