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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 肽 离子交换 分离
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njcj

新虫 (小有名气)

[求助] 肽 离子交换 分离

本人从大米蛋白水解产物中分离多肽（或小肽），先用凝胶过滤，然后用阴离子交换（DEAE-sphacrose-FF）。看了一些文献，平衡液pH值（也就是洗脱液和肽溶解液）差别很大，有的用4.5，有的8.5，有的直接用去离子水（中性）。
问题：阴离子交换色谱，应该让肽带上负电，pH高于肽等电点时才带负电。一般用多高的pH溶解和洗脱啊？谢谢
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1楼 2013-05-10 17:31:19
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
njcj(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-10 22:48:23
njcj: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2013-05-11 17:56:21
从你的述说衷，可以确定：这个肽的PI值应该是小于4.5的吧？？

溶解？什么意思？溶解蛋白吗？如果是的话，pH当然是与你的Elution buffer 保持一致!


多高的pH较合适？这个没有办法回答你，每个蛋白挂离子柱的能力，在不同的pH条件下，挂柱的能力是不一样的！
最佳的pH需要你自己摸索！你可以拉梯度来确定！

我建议：因为你过阴离子柱，可以考虑选择用tris作缓冲，pH可以选择8.0 。因为tris的缓冲范围较大，且对蛋白稳定性较好。在pH8.0左右缓冲能力最强，可以先试试！
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长得比我英俊的，没我有才华！有才华的，没我长得俊！
2楼2013-05-10 18:56:38
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mitocam

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
njcj(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-10 22:48:31
njcj: 金币+2, ★有帮助, 谢谢！ 2013-05-11 17:56:49
DEAE_sepharose-FF结合力较差，建议用DEAE－HP或更强的Q，做阴离子交换。
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3楼2013-05-10 20:21:20
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