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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 土壤中菌根真菌孢子的筛选
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实验小奴才

新虫 (初入文坛)

[求助] 土壤中菌根真菌孢子的筛选

我运用湿筛法从土壤中筛选菌根真菌的孢子，一直筛不出来，但是对寄主植物根染色能看到菌丝，请问有没有前辈可以指导一下筛选方法啊？
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1楼 2013-05-09 19:22:38
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yyr720

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+3, 鼓励新虫 2013-05-10 16:31:14
你用的最下层筛子的孔径有多大？是不是漏下去了？
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时间，只要你充分利用，它便是长久的
2楼2013-05-10 00:24:40
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实验小奴才

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yyr720 at 2013-05-10 00:24:40
你用的最下层筛子的孔径有多大？是不是漏下去了？

是400目的，这个应该不会漏吧！我看文献上一般都是200目啊！筛选出来怎么鉴别是不是孢子啊？要通过染色吗？还有就是怎么把孢子分离出来呢？谢谢！！！
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3楼2013-05-10 18:25:23
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liygmail

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
实验小奴才: 金币+5, ★有帮助 2013-05-16 22:09:27
在解剖镜下，菌根真菌的孢子无须染色就可见，由于孢子大小形态规则，易于和土壤中杂质分别开，一般可用移液枪移取
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4楼2013-05-16 16:46:37
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实验小奴才

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by liygmail at 2013-05-16 16:46:37
在解剖镜下，菌根真菌的孢子无须染色就可见，由于孢子大小形态规则，易于和土壤中杂质分别开，一般可用移液枪移取

谢谢！孢子是几近半透明的吗？浅棕色吗？
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5楼2013-05-16 21:48:54
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liygmail

至尊木虫 (职业作家)
是的
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6楼2013-05-17 22:19:43
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实验小奴才

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by liygmail at 2013-05-17 22:19:43
是的

枪头要吸一些水吗？
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7楼2013-05-17 22:43:15
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liygmail

至尊木虫 (职业作家)
将湿筛后土样和一些残留的水混合倒在几个培养皿里，用带枪头的移液枪吸取含有孢子的水移至装有干净水的培养皿，如果还有杂质，可连续多转移几个培养皿，
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8楼2013-05-18 21:08:23
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实验小奴才

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by liygmail at 2013-05-18 21:08:23
将湿筛后土样和一些残留的水混合倒在几个培养皿里，用带枪头的移液枪吸取含有孢子的水移至装有干净水的培养皿，如果还有杂质，可连续多转移几个培养皿，

不需要蔗糖浓度梯度离心吗？
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9楼2013-05-19 09:58:42
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liygmail

至尊木虫 (职业作家)
如果少量提取孢子，可在解剖镜下用移液枪吸取，依次几个盛放干净水的培养皿中漂洗，一般就可以去除大多杂质。
如果大量提取孢子，可将样品用流水冲洗，过筛，再将筛倒置，用流水将筛面截留的孢子洗入小烧杯中，摇动混匀，转移至50ml离心管，再轻缓加入等量60% (w/v) 蔗糖溶液，3000 rpm 离心 2 min，大部分孢子集中分布于上层水相和下层蔗糖之间，移取即可，（某些种的孢子可能在糖溶液里，过筛，可回收）
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10楼2013-05-19 13:02:36
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