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Bella0224

金虫 (小有名气)

[求助] 毛状根 培养

各位虫友好,依旧还是那个做毛状根死活做不出来的家伙。。。

这里很像问下各位,毛状根的培养,会不会出现假阳性?

我的根长出来的,可能形态上比较像毛状根,但会不会不是毛状根?(因为进行PCR鉴定,毛状根没有出现rolC基因,而农杆菌A4的阳性对照却在500bp有条带出现)

现在就觉得自己培养出来的毛状根是假的。。。第三张PCR的图片,亮带是我的阳性Ri质粒的对照,旁边就是我的毛状根,啥都木有。。。。。。

求助各位。。。。

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Bella0224

金虫 (小有名气)

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引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-09 16:14:20
这种问题以前我也遇到过,首先楼主可以检查毛根DNA提取,在PCR时可以考虑做个毛根的阳性对照(找个肯定能从毛根DNAP出来的,譬如植物某些保守基因);其次,相较于正常根,毛根生长非常快速,没有向地性,而且在培养 ...

请问薄层层析冠瘿碱是利用高压纸电泳么?因为文献上写的很模糊,我不是特别明白。。。
3楼2013-05-10 10:02:44
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这种问题以前我也遇到过,首先楼主可以检查毛根DNA提取,在PCR时可以考虑做个毛根的阳性对照(找个肯定能从毛根DNAP出来的,譬如植物某些保守基因);其次,相较于正常根,毛根生长非常快速,没有向地性,而且在培养基中不需要外源的激素,不知道楼主的培养体系如何?最后,如果从生长状态上看是毛状根,但PCR始终不理想,如果条件允许,还可以通过薄层层析检测冠瘿碱来辅助判断。

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植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2013-05-09 16:14:20
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by Bella0224 at 2013-05-10 10:02:44
请问薄层层析冠瘿碱是利用高压纸电泳么?因为文献上写的很模糊,我不是特别明白。。。...

我以前遇到类似你的问题时,曾考虑做这个,但不用高压纸电泳,做药化的同学建议我用一般的薄层层析法。楼主还是先从DNA提取和PCR着手看看有什么问题,最后实在没法判断再考虑检测冠瘿碱。
楼主有没试着把毛根转导一般MS培养基上看它的生长情况?
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
4楼2013-05-10 16:37:09
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Bella0224

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-10 16:37:09
我以前遇到类似你的问题时,曾考虑做这个,但不用高压纸电泳,做药化的同学建议我用一般的薄层层析法。楼主还是先从DNA提取和PCR着手看看有什么问题,最后实在没法判断再考虑检测冠瘿碱。
楼主有没试着把毛根转导 ...

我转到MS的液体培养基,然后没什么大变化,不像文献上说的长的像头发一样,但是我之前提取的时候,被侵染的叶片根附近有小小的瘤,很像冠瘿瘤,因此我觉得我诱导的应该是毛状根,但是PCR就是没结果。。。

我单独把阳性对照拿出来P来着,条件什么的都摸出来了,同样的条件,同样的体系,目的条带就是木有。。。。

我用的微量DNA提取毛状根DNA,浓度还挺高的,700多纳克/微升,可是就是木有条带。。。

现在特别痛苦,做了快一年了,就是出不来。。。
5楼2013-05-10 17:29:32
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