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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 毛状根 培养
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Bella0224

金虫 (小有名气)

[求助] 毛状根 培养

各位虫友好，依旧还是那个做毛状根死活做不出来的家伙。。。

这里很像问下各位，毛状根的培养，会不会出现假阳性？

我的根长出来的，可能形态上比较像毛状根，但会不会不是毛状根？（因为进行PCR鉴定，毛状根没有出现rolC基因，而农杆菌A4的阳性对照却在500bp有条带出现）

现在就觉得自己培养出来的毛状根是假的。。。第三张PCR的图片，亮带是我的阳性Ri质粒的对照，旁边就是我的毛状根，啥都木有。。。。。。

求助各位。。。。

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1楼 2013-05-09 09:39:08
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这种问题以前我也遇到过，首先楼主可以检查毛根DNA提取，在PCR时可以考虑做个毛根的阳性对照（找个肯定能从毛根DNAP出来的，譬如植物某些保守基因）；其次，相较于正常根，毛根生长非常快速，没有向地性，而且在培养基中不需要外源的激素，不知道楼主的培养体系如何？最后，如果从生长状态上看是毛状根，但PCR始终不理想，如果条件允许，还可以通过薄层层析检测冠瘿碱来辅助判断。
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Bella0224
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2楼2013-05-09 16:14:20
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Bella0224

金虫 (小有名气)
送红花一朵
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2楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-09 16:14:20
这种问题以前我也遇到过，首先楼主可以检查毛根DNA提取，在PCR时可以考虑做个毛根的阳性对照（找个肯定能从毛根DNAP出来的，譬如植物某些保守基因）；其次，相较于正常根，毛根生长非常快速，没有向地性，而且在培养 ...

请问薄层层析冠瘿碱是利用高压纸电泳么？因为文献上写的很模糊，我不是特别明白。。。
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3楼2013-05-10 10:02:44
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

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3楼: Originally posted by Bella0224 at 2013-05-10 10:02:44
请问薄层层析冠瘿碱是利用高压纸电泳么？因为文献上写的很模糊，我不是特别明白。。。...

我以前遇到类似你的问题时，曾考虑做这个，但不用高压纸电泳，做药化的同学建议我用一般的薄层层析法。楼主还是先从DNA提取和PCR着手看看有什么问题，最后实在没法判断再考虑检测冠瘿碱。
楼主有没试着把毛根转导一般MS培养基上看它的生长情况？
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4楼2013-05-10 16:37:09
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Bella0224

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-10 16:37:09
我以前遇到类似你的问题时，曾考虑做这个，但不用高压纸电泳，做药化的同学建议我用一般的薄层层析法。楼主还是先从DNA提取和PCR着手看看有什么问题，最后实在没法判断再考虑检测冠瘿碱。
楼主有没试着把毛根转导 ...

我转到MS的液体培养基，然后没什么大变化，不像文献上说的长的像头发一样，但是我之前提取的时候，被侵染的叶片根附近有小小的瘤，很像冠瘿瘤，因此我觉得我诱导的应该是毛状根，但是PCR就是没结果。。。

我单独把阳性对照拿出来P来着，条件什么的都摸出来了，同样的条件，同样的体系，目的条带就是木有。。。。

我用的微量DNA提取毛状根DNA，浓度还挺高的，700多纳克/微升，可是就是木有条带。。。

现在特别痛苦，做了快一年了，就是出不来。。。
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5楼2013-05-10 17:29:32
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starseacow

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5楼: Originally posted by Bella0224 at 2013-05-10 17:29:32
我转到MS的液体培养基，然后没什么大变化，不像文献上说的长的像头发一样，但是我之前提取的时候，被侵染的叶片根附近有小小的瘤，很像冠瘿瘤，因此我觉得我诱导的应该是毛状根，但是PCR就是没结果。。。

我单独 ...

毛状根移到无激素MS后仍可以快速生长，这是最显著的特征，根部的小瘤，我觉得不太适合用来作判断。毛根移到MS里以后，还继续生长么？楼主有没试着移到MS固体培养基上，那样可以更直观看到毛根生长
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Bella0224
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6楼2013-05-10 17:55:44
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Bella0224

金虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-10 17:55:44
毛状根移到无激素MS后仍可以快速生长，这是最显著的特征，根部的小瘤，我觉得不太适合用来作判断。毛根移到MS里以后，还继续生长么？楼主有没试着移到MS固体培养基上，那样可以更直观看到毛根生长...

我将毛根移到MS上了，也长了，但是长的不快，我的MS是全MS，不是二分之一的，他可以立体生长，但是不快速。。。

我觉得是不是我的培养基不好。。。
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7楼2013-05-12 14:35:22
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starseacow

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【答案】应助回帖

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7楼: Originally posted by Bella0224 at 2013-05-12 14:35:22
我将毛根移到MS上了，也长了，但是长的不快，我的MS是全MS，不是二分之一的，他可以立体生长，但是不快速。。。

我觉得是不是我的培养基不好。。。...

长的不快是指多么不快？
在无激素MS培养基上，一般能生长的只有毛根，正常植物根是无法生长的，至于生长速度问题，这可能需要楼主未来进行培养条件优化，试试1/2 MS，B5等等
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8楼2013-05-12 19:12:48
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xuehongbai

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也是做毛状根的小白，但有篇文献，何首乌毛壮根诱导方面的，作者使用R1601和另外一种菌种，都可以诱导毛状根，但R1601诱导的无目的DNA条带，所以是不是菌种的问题？同一种类型外植体上诱导的毛状根，基因型也不相同，是不是刚好测的毛状根无该基因？如果毛状根好长的话，是不是可以用抗生素选择压力的方法，减少其他根的出现？
另，求A4菌种
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dnf
9楼2013-05-25 23:33:26
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starseacow

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9楼: Originally posted by xuehongbai at 2013-05-25 23:33:26
我也是做毛状根的小白，但有篇文献，何首乌毛壮根诱导方面的，作者使用R1601和另外一种菌种，都可以诱导毛状根，但R1601诱导的无目的DNA条带，所以是不是菌种的问题？同一种类型外植体上诱导的毛状根，基因型也不相 ...

1 你参考的是什么文献，有些中英文文献仅可参考不可尽信
2 R1601应该问题不大，可以诱导出毛根，但不同菌株对不同物种侵染效率不同，你应该首先确认你拥有的R1601曾被用于成功诱导别的植物
3 没有DNA条带，不一定不是毛根，你的检测手段是否有问题，需要一步步分析
4 没有激素的培养基上，非毛根无法继续快速生长的，这是最简单的判别法。至于抗生素选择，取决于你选择的具体菌种特点的。
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10楼2013-05-26 03:40:54
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