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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 用吸光度比较细菌数量时，怎样去除有色培养基的背景值
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yingying9931

新虫 (初入文坛)

[求助] 用吸光度比较细菌数量时，怎样去除有色培养基的背景值

比较细菌在两种不同的培养基中的生长速率，首先加重到液体培养基里的时候，怎样保证接种的量是一样的（细菌原来在固体培养基上）？不一样的话影响大吗？用吸光度比较两种培养基哪个长得快，可是一种培养基有颜色，怎么比较？
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1楼 2013-05-05 21:52:42
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

匿名

用户注销 (知名作家)
★ ★
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laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助交流！ 2013-05-07 20:31:21
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2楼2013-05-05 22:02:24
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Hliotrope

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励新虫应助！ 2013-05-07 20:30:55
先把固体平板上的菌制成液体种子，然后用液体种子再接种两个培养基，这样不就保证了接种量一样了嘛，对比那个，我不知道你的培养基是固体还是液体，液体的话把菌离出来用相同量缓冲液分别重悬菌体，然后测OD值，就可以避免培养基颜色干扰
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Someone
6楼2013-05-06 09:16:28
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普通回帖

yingying9931

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shangyukuan at 2013-05-05 22:02:24
要想接种量一样只有用液体的接到液体的了，而且一定要两种培养基的同时接。
测吸光度时要分别用你的两种培养基调零的，楼主没有实际操作过吧

没有操作过  我这个其实不用比较到底长了多少菌  只比较哪个长得快就可以了  要是从固体到液体 量不一样影响大吗 谢谢了
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3楼2013-05-05 22:10:17
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匿名

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4楼2013-05-05 22:18:39
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lpl0032

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-05-07 20:30:42
用培养基比色也会有误差，实际操作也繁琐，其实去除背景干扰很简单，每次测之前，定量取如5ml菌液，离心，去除上清液，然后用缓冲液或者生理盐水重新定容到5ml即可。
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endnote
5楼2013-05-06 08:32:14
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zcqh27

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
培养基有颜色无所谓啊，但是要确定培养基的颜色对OD值的检测有没有影响。有些有颜色的培养基对检测是没有影响的，因为菌体是在某个波段测量的吸光值，在相应条件下，颜色是没有影响的。
你可以先试一下
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7楼2013-05-06 09:38:53
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shunzhifulin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主，关于吸光度的影响楼上有了好多解释了。我要说的是你的比较方法。看了你的描述，你的目的是要比较菌体在不同培养基中的生长速度吧。起始的OD不管你是接了多少，都不会差很多的，我觉得你根本就测不出两者的差别，但实际上接种量有可能差很多。这样也不要紧，你可以分别作在两个培养基中的生长曲线，通过曲线的趋势来判断生长的快慢，并结合最终的菌体浓度进行评价。
你说的保证接种量一样，这比较困难，也没什么必要。
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8楼2013-05-06 16:43:01
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carrieskl

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
比较生长速度最好还是要把两株菌的接种量调成一样的，不一样的话，可能一个平台期长一个短，做出来的曲线难以比较。可以先把菌落挑出来在生理盐水中悬浮，再分别接种到两种培养基中。
颜色没有影响，要用空白的培养基做对照，减去空白的OD就成了
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争做医生中最好的厨子
9楼2013-05-07 15:32:26
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yingying9931

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shangyukuan at 2013-05-05 22:18:39
这样呀，你用一块平板上的菌，菌落大小无差别的，是可以的，当然接种时要把整个菌落都挑起来...

亲 请问测菌液OD值的时候 数值一直不稳定  是看最初的数值还是稳定下来的  要等多长时间  另外 我不知道怎么把悬赏的五个金币给你  不知道怎么操作  应该点哪里呢
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10楼2013-05-13 21:36:08
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