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yingying9931

新虫 (初入文坛)

[求助] 用吸光度比较细菌数量时,怎样去除有色培养基的背景值

比较细菌在两种不同的培养基中的生长速率,首先加重到液体培养基里的时候,怎样保证接种的量是一样的(细菌原来在固体培养基上)?不一样的话影响大吗?用吸光度比较两种培养基哪个长得快,可是一种培养基有颜色,怎么比较?
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匿名

用户注销 (知名作家)

★ ★
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laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助交流! 2013-05-07 20:31:21
本帖仅楼主可见
2楼2013-05-05 22:02:24
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Hliotrope

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励新虫应助! 2013-05-07 20:30:55
先把固体平板上的菌制成液体种子,然后用液体种子再接种两个培养基,这样不就保证了接种量一样了嘛,对比那个,我不知道你的培养基是固体还是液体,液体的话把菌离出来用相同量缓冲液分别重悬菌体,然后测OD值,就可以避免培养基颜色干扰
Someone
6楼2013-05-06 09:16:28
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普通回帖

yingying9931

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shangyukuan at 2013-05-05 22:02:24
要想接种量一样只有用液体的接到液体的了,而且一定要两种培养基的同时接。
测吸光度时要分别用你的两种培养基调零的,楼主没有实际操作过吧

没有操作过  我这个其实不用比较到底长了多少菌  只比较哪个长得快就可以了  要是从固体到液体 量不一样影响大吗 谢谢了
3楼2013-05-05 22:10:17
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匿名

用户注销 (知名作家)

本帖仅楼主可见
4楼2013-05-05 22:18:39
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lpl0032

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助! 2013-05-07 20:30:42
用培养基比色也会有误差,实际操作也繁琐,其实去除背景干扰很简单,每次测之前,定量取如5ml菌液,离心,去除上清液,然后用缓冲液或者生理盐水重新定容到5ml即可。
endnote
5楼2013-05-06 08:32:14
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zcqh27

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
培养基有颜色无所谓啊,但是要确定培养基的颜色对OD值的检测有没有影响。有些有颜色的培养基对检测是没有影响的,因为菌体是在某个波段测量的吸光值,在相应条件下,颜色是没有影响的。
你可以先试一下
7楼2013-05-06 09:38:53
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shunzhifulin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主,关于吸光度的影响楼上有了好多解释了。我要说的是你的比较方法。看了你的描述,你的目的是要比较菌体在不同培养基中的生长速度吧。起始的OD不管你是接了多少,都不会差很多的,我觉得你根本就测不出两者的差别,但实际上接种量有可能差很多。这样也不要紧,你可以分别作在两个培养基中的生长曲线,通过曲线的趋势来判断生长的快慢,并结合最终的菌体浓度进行评价。
你说的保证接种量一样,这比较困难,也没什么必要。
8楼2013-05-06 16:43:01
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carrieskl

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
比较生长速度最好还是要把两株菌的接种量调成一样的,不一样的话,可能一个平台期长一个短,做出来的曲线难以比较。可以先把菌落挑出来在生理盐水中悬浮,再分别接种到两种培养基中。
颜色没有影响,要用空白的培养基做对照,减去空白的OD就成了
争做医生中最好的厨子
9楼2013-05-07 15:32:26
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yingying9931

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by shangyukuan at 2013-05-05 22:18:39
这样呀,你用一块平板上的菌,菌落大小无差别的,是可以的,当然接种时要把整个菌落都挑起来...

亲 请问测菌液OD值的时候 数值一直不稳定  是看最初的数值还是稳定下来的  要等多长时间  另外 我不知道怎么把悬赏的五个金币给你  不知道怎么操作  应该点哪里呢
10楼2013-05-13 21:36:08
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