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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR扩增结果不好
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小绘64

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by mruber at 2013-05-03 21:31:24
我也觉得扩增时对酶的选择很重要。不同品牌的差别还是比较大。另外就是要选择适宜的扩增温度和条件，同时仔细阅读厂商推荐的说明书。
推荐你使用KOD系列(TOYOBO),我一直都用，扩增效率杠杠的。

谢谢你，，，前三个泳道我就用的普通的Taq酶，扩增效率也很好的。后两组因为课题需要，需要用无3‘到5’外切酶活性的聚合酶，所以KOD系列的在这不合适，以后有需要会考虑用这个
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11楼2013-05-03 23:43:01
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小绘64

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by study韩 at 2013-05-02 22:04:28
第一，目的片段太小，退火温度设置的比较低，因此易出现引物条带！你可以做一个梯度吧，我觉得！第二，和酶肯定也有关系，不同的酶最适温度肯定不一样，所以酶也需要考虑下！第三，引物特异性应该仍需加强，毕竟片段 ...

这三组的模板用的是一样的，只是引物不一样，第一组用的正常DNA引物，效率还是可以的。后两组用的RNA引物，当然酶也不一样，同第一组该筛的条件都筛了，可是效率还是不高。。。
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12楼2013-05-03 23:45:43
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study韩

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 小绘64 at 2013-05-03 23:45:43
这三组的模板用的是一样的，只是引物不一样，第一组用的正常DNA引物，效率还是可以的。后两组用的RNA引物，当然酶也不一样，同第一组该筛的条件都筛了，可是效率还是不高。。。...

额，那我就不知道了！不好意思！你再问问师兄师姐吧，祝你实验成功！
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13楼2013-05-04 08:55:36
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