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小绘64

铜虫 (小有名气)

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专业: 药物化学

[求助] PCR扩增结果不好

前三个一组，中间三个一组，后三个一组。每组的最后一个是空白对照。
每组用的模板都是一样的，引物不一样。
第一组扩增效果比较好，下面也没有引物条带，后两组扩增效率太低，有明显的引物条带。。。请问大家可以从哪些方面优化条件？

5.2-2.jpg

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1楼 2013-05-02 17:14:22

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小绘64

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引用回帖:

8楼: Originally posted by study韩 at 2013-05-02 22:04:28
第一，目的片段太小，退火温度设置的比较低，因此易出现引物条带！你可以做一个梯度吧，我觉得！第二，和酶肯定也有关系，不同的酶最适温度肯定不一样，所以酶也需要考虑下！第三，引物特异性应该仍需加强，毕竟片段 ...

这三组的模板用的是一样的，只是引物不一样，第一组用的正常DNA引物，效率还是可以的。后两组用的RNA引物，当然酶也不一样，同第一组该筛的条件都筛了，可是效率还是不高。。。