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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR扩增结果不好
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小绘64

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增结果不好

前三个一组，中间三个一组，后三个一组。 每组的最后一个是空白对照。
每组用的模板都是一样的，引物不一样。
第一组扩增效果比较好，下面也没有引物条带，后两组扩增效率太低，有明显的引物条带。。。请问大家可以从哪些方面优化条件？

5.2-2.jpg
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1楼 2013-05-02 17:14:22
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小绘64

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by mruber at 2013-05-03 21:31:24
我也觉得扩增时对酶的选择很重要。不同品牌的差别还是比较大。另外就是要选择适宜的扩增温度和条件，同时仔细阅读厂商推荐的说明书。
推荐你使用KOD系列(TOYOBO),我一直都用，扩增效率杠杠的。

谢谢你，，，前三个泳道我就用的普通的Taq酶，扩增效率也很好的。后两组因为课题需要，需要用无3‘到5’外切酶活性的聚合酶，所以KOD系列的在这不合适，以后有需要会考虑用这个
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11楼2013-05-03 23:43:01
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guaiyaya

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这个没有扩出来吧。。。多长的片段？
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2楼2013-05-02 17:55:20
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710002191

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小绘64(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-04 01:36:19
要是引物没问题的话，那就做个梯度PCR，改变退火温度试试，应该没有大问题
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may
3楼2013-05-02 18:03:16
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baseball

禁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小绘64: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-05-02 21:01:22
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-02 22:08:13
本帖内容被屏蔽
4楼2013-05-02 20:06:01
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