24小时热门版块排行榜    

查看: 3644  |  回复: 18
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zhuqinjian

金虫 (小有名气)

[求助] SaII和BamHI双酶切切不开

我用T载体与目的片段连接后,导入JM109中,用菌落PCR也能P出目的片段,提取质粒后PCR也能P出来,电泳跑出来的片段也正确(环状片段跑出来有3条带),但是用SaII和BamHI双酶切就是切不出来,只有一条带。求大神指导啊?是不是只是单酶切了啊?为啥双酶切切不出来呢?
回复此楼
坚定方向,坚持下去
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蝴蝶110

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 8601 at 2013-05-03 06:40:07
SalI 这个酶感觉活性不如其他酶。 可能你的DNA里面有些杂质,抑制了SalI的活性。我曾经遇到过这样的情况,做了几个miniprep, 用bamHI 和 XhoI 都能切开,用SalI 时有的能全部切开,有时只有很微弱的带子,有的压根切 ...

求助一份BamHI SalI的中文说明书,我买的是NEB公司的
16楼2013-06-16 18:11:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhuqinjian: 金币+5, 有帮助, 单酶切做了下,发现Sal I没有切开,哎不知道怎么回事 2013-05-02 11:01:09
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-02 12:01:23
分别做单切,确定是那个酶不能工作!此外,PCR的鉴定时候是否有加入阴性与阳性对照,我想担心你所看到的片段是都就是目的片段!希望对你有用!
2楼2013-05-02 10:20:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dafeizizhu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhuqinjian: 金币+3, 有帮助, 我是用捷瑞的试剂盒提的质粒,我觉得应该不是这个问题吧 2013-05-02 11:02:21
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-02 12:01:31
酶切之前,样品质粒要进行除酶,除盐,除乙醇等处理。一般就是酚氯仿抽提,技术要过关,不要在后面醇沉时留下太多的乙醇。上面说的单酶切验证酶是否失效是可行的,但是样品必须干净。内切酶很受离子和乙醇等物质影响的。
3楼2013-05-02 10:50:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhuqinjian: 金币+5, 有帮助, 的确是这样的,我考虑重新连T载体再做一下,然后再送去测序 2013-05-02 11:03:49
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-02 12:01:38
gyesang: 回帖置顶 2013-05-02 12:01:46
用载体上的引物对插入片段测序,最靠谱
4楼2013-05-02 11:01:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 4/200 2026-08-15 04:17 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +11 Tide man 2026-08-10 12/600 2026-08-15 02:12 by home3163
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:40 by 4wMiSEwB6436
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 7lpolszZVXgi 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:08 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 HFw0lei2R37i 2026-08-14 8/400 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见