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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » his-tag抗不出来
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478203301

金虫 (小有名气)

[求助] his-tag抗不出来

我们请公司构建的neuritin蛋白，以pcDNA3.1为载体，tag标签在C端，在NCBI上blast序列比对也是正确的，但是用his标签一直抗不出来，也换过几家抗体，都抗不出来，有人遇到过同样的问题吗？
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1楼 2013-04-27 20:22:40
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478203301

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by panyuzhu at 2013-04-28 13:28:05
你按上面几个虫友说的，
1.确定目的蛋白已经表达了，
   这中间涉及转染，G418筛选单克隆，SDS-PAGE检测，而你只是一句公司帮构建表达载体，测序正确带过，我们都不知道你是否筛选了
2.WB 带个内参，证明你操作上 ...

我再从头把过程想一遍吧 谢谢了 很受用
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12楼2013-04-28 16:41:06
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
2楼2013-04-27 20:59:00
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478203301

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by panyuzhu at 2013-04-27 20:59:00
“]his-tag抗不出来 ”“his标签一直抗不出来”
好山寨的表述啊。

嗯 对 表述有误  应该是  我们请公司构建的neuritin 蛋白，以pcDNA3.1作为载体，his标签在C端，构建回来后序列比对也是正确的，但是用his抗体一直抗不出来，换过几家公司的抗体，都没有抗出来，希望高手予以指点  这样行吗？  阁下有高见吗？
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3楼2013-04-27 22:59:12
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
3楼: Originally posted by 478203301 at 2013-04-27 22:59:12
嗯 对 表述有误  应该是  我们请公司构建的neuritin 蛋白，以pcDNA3.1作为载体，his标签在C端，构建回来后序列比对也是正确的，但是用his抗体一直抗不出来，换过几家公司的抗体，都没有抗出来，希望高手予以指点   ...

我们做WB，一般说压蛋白，杂蛋白，不说抗蛋白哈，1楼说你表述山寨，我想他应该指的是这个
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-04-28 02:31:36
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