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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于cDNA的疑惑
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新人小玥

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
8楼: Originally posted by 飘雪3889 at 2013-04-19 08:39:28
谢谢！从我的目的来看，我是要得到某种微生物里面的酶，而这个微生物的基因序列未知。我从提取mRNA、建cDNA 文库出发，比从提取DNA出发构建基因组文库，要更合适些，不知道是不是可以这样理解？...

得到酶？你是指克隆这个酶的基因么？如果这样的话，就用RNA来做就行。至于要不要搞到建库这么复杂呢，你再考虑一下。如果是一种酶就没必要建库了吧。
如果仅仅是得到酶的话，从蛋白的水平入手就行啦。那岂不是更快
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11楼2013-04-19 14:56:55
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飘雪3889

木虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 新人小玥 at 2013-04-19 14:56:55
得到酶？你是指克隆这个酶的基因么？如果这样的话，就用RNA来做就行。至于要不要搞到建库这么复杂呢，你再考虑一下。如果是一种酶就没必要建库了吧。
如果仅仅是得到酶的话，从蛋白的水平入手就行啦。那岂不是更快...

但是这个微生物以及这个酶的基因序列都未知呢？我的目的是要找到这段酶的基因，并且实现克隆表达。
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12楼2013-04-19 15:01:20
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飘雪3889

木虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 新人小玥 at 2013-04-19 14:56:55
得到酶？你是指克隆这个酶的基因么？如果这样的话，就用RNA来做就行。至于要不要搞到建库这么复杂呢，你再考虑一下。如果是一种酶就没必要建库了吧。
如果仅仅是得到酶的话，从蛋白的水平入手就行啦。那岂不是更快...

要表达出这个酶的蛋白质，在无细胞的情况下完成其催化功能。
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13楼2013-04-19 15:03:07
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新人小玥

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 飘雪3889 at 2013-04-19 15:01:20
但是这个微生物以及这个酶的基因序列都未知呢？我的目的是要找到这段酶的基因，并且实现克隆表达。...

那你知道这个酶是什么酶吗？
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14楼2013-04-19 15:05:53
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fanchuannan

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by panyuzhu at 2013-04-18 20:26:03
1. 以mRNA来源的是cDNA文库。
2. 以总RNA来源的是基因组DNA文库。


库 库  专业点好不好，你以为是优衣裤啊!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!这种答案都被采纳。小木虫让人捉急啊

哈哈，虫虫哥你的每个回复都是那么幽默又到位
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Tomakeeachdaycount。
15楼2013-04-20 20:46:49
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
16楼2013-04-20 21:19:40
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fanchuannan

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by panyuzhu at 2013-04-20 21:19:40
本来科研就枯燥的，说得好玩且不离本宗多开心...

恩呢！我倒是挺期待研究生生活的
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Tomakeeachdaycount。
17楼2013-04-20 21:37:32
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飘雪3889

木虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 新人小玥 at 2013-04-19 15:05:53
那你知道这个酶是什么酶吗？...

这个知道。但是这个酶在不同的物种里面同源性并不高。
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18楼2013-04-21 17:31:38
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新人小玥

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
18楼: Originally posted by 飘雪3889 at 2013-04-21 17:31:38
这个知道。但是这个酶在不同的物种里面同源性并不高。...

那你是怎么想的呢？要建什么样的库，建库之后怎么测呢？
如果知道该酶，还是同源克隆比较靠谱吧，建库过程复杂，而且你只要一种酶，建库之后有那么多的候选基因，你又如何选择呢？
若是能将这酶提出来，直接打质谱，这个更快一点吧。。。
不过这也是我个人想法，我也没做过。仅参考而已，参考而已哈。。
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飘雪3889
19楼2013-04-22 03:28:38
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

第一：RT-PCR的模板不是RNA或mRNA,RT是反转录的意思，所以模板是cDNA。第二如果知道基因的cDNA序列，做RT-PCR是直接提取总RNA，然后反转成cDNA做模板，利用特异性引物，进行PCR就行。mRNA一般是为了建某一特殊时期的cDNA文库用的，你可以查构建cDNA文库的过程。第三：直接从cDNA序列中找到基因是什么意思？一般cDNA序列就是指某个基因的cDNA序列，直接根据cDNA序列设计引物，PCR方法得到目的基因。第四：构建cDNA文库一般是为了研究某种处理，或者某种逆境下，生物体内所有的RNA的表达变化，把这一时期的mRNA构建成cDNA文库，然后再详细研究每条cDNA的功能。
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飘雪3889
20楼2013-04-22 10:55:28
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