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新人小玥

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
8楼: Originally posted by 飘雪3889 at 2013-04-19 08:39:28
谢谢!从我的目的来看,我是要得到某种微生物里面的酶,而这个微生物的基因序列未知。我从提取mRNA、建cDNA 文库出发,比从提取DNA出发构建基因组文库,要更合适些,不知道是不是可以这样理解?...

得到酶?你是指克隆这个酶的基因么?如果这样的话,就用RNA来做就行。至于要不要搞到建库这么复杂呢,你再考虑一下。如果是一种酶就没必要建库了吧。
如果仅仅是得到酶的话,从蛋白的水平入手就行啦。那岂不是更快
11楼2013-04-19 14:56:55
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飘雪3889

木虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 新人小玥 at 2013-04-19 14:56:55
得到酶?你是指克隆这个酶的基因么?如果这样的话,就用RNA来做就行。至于要不要搞到建库这么复杂呢,你再考虑一下。如果是一种酶就没必要建库了吧。
如果仅仅是得到酶的话,从蛋白的水平入手就行啦。那岂不是更快...

但是这个微生物以及这个酶的基因序列都未知呢?我的目的是要找到这段酶的基因,并且实现克隆表达。
12楼2013-04-19 15:01:20
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飘雪3889

木虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 新人小玥 at 2013-04-19 14:56:55
得到酶?你是指克隆这个酶的基因么?如果这样的话,就用RNA来做就行。至于要不要搞到建库这么复杂呢,你再考虑一下。如果是一种酶就没必要建库了吧。
如果仅仅是得到酶的话,从蛋白的水平入手就行啦。那岂不是更快...

要表达出这个酶的蛋白质,在无细胞的情况下完成其催化功能。
13楼2013-04-19 15:03:07
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新人小玥

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 飘雪3889 at 2013-04-19 15:01:20
但是这个微生物以及这个酶的基因序列都未知呢?我的目的是要找到这段酶的基因,并且实现克隆表达。...

那你知道这个酶是什么酶吗?
14楼2013-04-19 15:05:53
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fanchuannan

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by panyuzhu at 2013-04-18 20:26:03
1. 以mRNA来源的是cDNA文库。
2. 以总RNA来源的是基因组DNA文库。


库 库  专业点好不好,你以为是优衣裤啊!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!这种答案都被采纳。小木虫让人捉急啊

哈哈,虫虫哥你的每个回复都是那么幽默又到位
Tomakeeachdaycount。
15楼2013-04-20 20:46:49
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

16楼2013-04-20 21:19:40
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fanchuannan

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by panyuzhu at 2013-04-20 21:19:40
本来科研就枯燥的,说得好玩且不离本宗多开心...

恩呢!我倒是挺期待研究生生活的
Tomakeeachdaycount。
17楼2013-04-20 21:37:32
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飘雪3889

木虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 新人小玥 at 2013-04-19 15:05:53
那你知道这个酶是什么酶吗?...

这个知道。但是这个酶在不同的物种里面同源性并不高。
18楼2013-04-21 17:31:38
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新人小玥

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
18楼: Originally posted by 飘雪3889 at 2013-04-21 17:31:38
这个知道。但是这个酶在不同的物种里面同源性并不高。...

那你是怎么想的呢?要建什么样的库,建库之后怎么测呢?
如果知道该酶,还是同源克隆比较靠谱吧,建库过程复杂,而且你只要一种酶,建库之后有那么多的候选基因,你又如何选择呢?
若是能将这酶提出来,直接打质谱,这个更快一点吧。。。
不过这也是我个人想法,我也没做过。仅参考而已,参考而已哈。。

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19楼2013-04-22 03:28:38
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

第一:RT-PCR的模板不是RNA或mRNA,RT是反转录的意思,所以模板是cDNA。第二如果知道基因的cDNA序列,做RT-PCR是直接提取总RNA,然后反转成cDNA做模板,利用特异性引物,进行PCR就行。mRNA一般是为了建某一特殊时期的cDNA文库用的,你可以查构建cDNA文库的过程。第三:直接从cDNA序列中找到基因是什么意思?一般cDNA序列就是指某个基因的cDNA序列,直接根据cDNA序列设计引物,PCR方法得到目的基因。第四:构建cDNA文库一般是为了研究某种处理,或者某种逆境下,生物体内所有的RNA的表达变化,把这一时期的mRNA构建成cDNA文库,然后再详细研究每条cDNA的功能。

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20楼2013-04-22 10:55:28
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