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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于cDNA的疑惑
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飘雪3889

木虫 (小有名气)

[求助] 关于cDNA的疑惑

菜鸟一枚，请教一下高手们：
1、RT-PCR 常用模板有细胞总RNA或从总RNA分离纯化的mRNA ，请问什么时候用总RNA什么时候合适用mRNA ，两种模板各有什么优势和缺点，各针对什么目的？
2、我在看文献时，有的是直接从从cDNA 序列中找到基因再克隆表达，有的构建了cDNA 文库，请问二者的区别，什么情况下需要构建cDNA 文库呢？
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1楼2013-04-18 15:55:16
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飘雪3889

木虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 新人小玥 at 2013-04-19 14:56:55
得到酶？你是指克隆这个酶的基因么？如果这样的话，就用RNA来做就行。至于要不要搞到建库这么复杂呢，你再考虑一下。如果是一种酶就没必要建库了吧。
如果仅仅是得到酶的话，从蛋白的水平入手就行啦。那岂不是更快...

但是这个微生物以及这个酶的基因序列都未知呢？我的目的是要找到这段酶的基因，并且实现克隆表达。
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12楼2013-04-19 15:01:20
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sl35537417

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-04-18 20:11:40
一般来说都是提取总RNA 然后反转cDNA 在进行克隆；除非特殊要求的实验才用纯mRNA。
其实上无论是总RNA 反转得到的cDNA  还是纯mRNA反转得到的cDNA  都应该是文库，因为理论上里面都包括了所有基因的cDNA    个人觉得可以称为库
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2楼2013-04-18 19:17:27
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
3楼2013-04-18 20:26:03
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飘雪3889

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by panyuzhu at 2013-04-18 20:26:03
1. 以mRNA来源的是cDNA文库。
2. 以总RNA来源的是基因组DNA文库。


库 库  专业点好不好，你以为是优衣裤啊!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!这种答案都被采纳。小木虫让人捉急啊

基因组DNA文库是直接从提取DNA来的吧，为啥还绕弯从总RNA出发？
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4楼2013-04-18 21:02:08
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