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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于cDNA的疑惑
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飘雪3889

木虫 (小有名气)

[求助] 关于cDNA的疑惑

菜鸟一枚，请教一下高手们：
1、RT-PCR 常用模板有细胞总RNA或从总RNA分离纯化的mRNA ，请问什么时候用总RNA什么时候合适用mRNA ，两种模板各有什么优势和缺点，各针对什么目的？
2、我在看文献时，有的是直接从从cDNA 序列中找到基因再克隆表达，有的构建了cDNA 文库，请问二者的区别，什么情况下需要构建cDNA 文库呢？
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1楼2013-04-18 15:55:16
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飘雪3889

木虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
20楼: Originally posted by wangqi1107 at 2013-04-22 10:55:28
第一：RT-PCR的模板不是RNA或mRNA,RT是反转录的意思，所以模板是cDNA。第二如果知道基因的cDNA序列，做RT-PCR是直接提取总RNA，然后反转成cDNA做模板，利用特异性引物，进行PCR就行。mRNA一般是为了建某一特殊时期的 ...

谢谢你回答得这么详细清晰！我的目的是从一个基因序列未知的微生物里找到其糖基转移酶的基因，再克隆表达出这种酶，然而这个微生物里面该酶的基因序列也未有报道。
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21楼2013-04-22 11:13:24
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sl35537417

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-04-18 20:11:40
一般来说都是提取总RNA 然后反转cDNA 在进行克隆；除非特殊要求的实验才用纯mRNA。
其实上无论是总RNA 反转得到的cDNA  还是纯mRNA反转得到的cDNA  都应该是文库，因为理论上里面都包括了所有基因的cDNA    个人觉得可以称为库
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2楼2013-04-18 19:17:27
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
3楼2013-04-18 20:26:03
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飘雪3889

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by panyuzhu at 2013-04-18 20:26:03
1. 以mRNA来源的是cDNA文库。
2. 以总RNA来源的是基因组DNA文库。


库 库  专业点好不好，你以为是优衣裤啊!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!这种答案都被采纳。小木虫让人捉急啊

基因组DNA文库是直接从提取DNA来的吧，为啥还绕弯从总RNA出发？
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4楼2013-04-18 21:02:08
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