24小时热门版块排行榜    

查看: 811  |  回复: 7

fuye612

铜虫 (小有名气)

[求助] 克隆启动子,用TAQ能P出条带,用PFU的时候总是弥散呢?求教于各位大侠!!!

克隆启动子,用TAQ能P出条带,用PFU的时候总是弥散呢?求教于各位大侠!!!
用50ul体系,退火温度比primer 低 3度(提高特异性),所用的酶没有问题。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
fuye612(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-31 23:09:44
片段不是太大的话Taq扩增出来可以直接克隆测序。pfu与taq是不同的聚合酶,最优PCR条件可能不同,你需要分别优化。
2楼2013-04-01 23:58:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aga0110125

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
fuye612(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-31 23:09:52
片段长的话,pfu的延伸时间是taq的2X,不能用同一程序扩增
3楼2013-04-02 13:33:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuye612

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by aga0110125 at 2013-04-02 13:33:23
片段长的话,pfu的延伸时间是taq的2X,不能用同一程序扩增

是这么做的。
4楼2013-04-03 14:54:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuye612

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-01 23:58:31
片段不是太大的话Taq扩增出来可以直接克隆测序。pfu与taq是不同的聚合酶,最优PCR条件可能不同,你需要分别优化。

片段在2000左右,您的意思是还需要摸一下退货温度?
5楼2013-04-03 14:57:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
图片发过来看看,380270985
6楼2013-04-03 16:10:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

内容已删除
7楼2013-04-03 16:11:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+1, 鼓励应助! 2013-04-04 13:33:29
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-31 23:10:02
引用回帖:
5楼: Originally posted by fuye612 at 2013-04-03 14:57:31
片段在2000左右,您的意思是还需要摸一下退货温度?...

如果你想用pfu扩增的话,是要摸下条件的。2K的片段用taq也不是不行,多送几个克隆测序有正确的就可以了。
8楼2013-04-04 02:41:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fuye612 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿郑州大学,080500学硕,总分317分求调剂 +3 举个栗子oi 2026-03-24 4/200 2026-03-26 20:49 by sanrepian
[考研] 求调剂 +5 芦lty 2026-03-25 6/300 2026-03-26 20:49 by 不吃魚的貓
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料,材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 8/400 2026-03-26 20:34 by Higraduate
[考研] 286求调剂 +13 Faune 2026-03-21 13/650 2026-03-26 19:52 by peike
[考研] 中国科学院深圳先进技术研究院-光纤传感课题组招生-中国科学院大学、深圳理工大学联培 +5 YangTyu1 2026-03-26 5/250 2026-03-26 18:27 by 猫咪猫咪呀
[考研] 275求调剂 +9 Micky11223 2026-03-25 11/550 2026-03-26 15:54 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿陕师大生物学071000,298分,求调剂 +4 SYA! 2026-03-23 4/200 2026-03-26 15:27 by caiaijun80
[考研] 考研调剂 +6 来好运来来来 2026-03-21 7/350 2026-03-25 22:43 by 418490947
[考研] 材料专硕 335 分求调剂 +4 拒绝冷暴力 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:45 by haxia
[考研] 311求调剂 +4 勇敢的小吴 2026-03-20 4/200 2026-03-25 18:12 by xcjcqu
[考研] 329求调剂 +3 钮恩雪 2026-03-25 3/150 2026-03-25 14:43 by 糖加冰
[考研] 085600材料与化工调剂 +9 A-哆啦Z梦 2026-03-23 15/750 2026-03-25 11:18 by Ainin_
[考研] 化工专硕求调剂 +3 question挽风 2026-03-24 3/150 2026-03-24 18:48 by jhhcooi
[考研] 材料专硕331求调剂 +4 鲜当牛 2026-03-24 4/200 2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
[考研] 305分求调剂(食品工程) +5 Sxy112 2026-03-21 7/350 2026-03-24 12:27 by 544594351
[考研] 求调剂一志愿海大,0703化学学硕304分,有大创项目,四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 一志愿华中科技大学071000,求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见