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fuye612

铜虫 (小有名气)

[求助] 克隆启动子,用TAQ能P出条带,用PFU的时候总是弥散呢?求教于各位大侠!!!

克隆启动子,用TAQ能P出条带,用PFU的时候总是弥散呢?求教于各位大侠!!!
用50ul体系,退火温度比primer 低 3度(提高特异性),所用的酶没有问题。
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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fuye612(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-31 23:09:44
片段不是太大的话Taq扩增出来可以直接克隆测序。pfu与taq是不同的聚合酶,最优PCR条件可能不同,你需要分别优化。
2楼2013-04-01 23:58:31
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aga0110125

银虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
fuye612(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-31 23:09:52
片段长的话,pfu的延伸时间是taq的2X,不能用同一程序扩增
3楼2013-04-02 13:33:23
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fuye612

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by aga0110125 at 2013-04-02 13:33:23
片段长的话,pfu的延伸时间是taq的2X,不能用同一程序扩增

是这么做的。
4楼2013-04-03 14:54:15
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fuye612

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-01 23:58:31
片段不是太大的话Taq扩增出来可以直接克隆测序。pfu与taq是不同的聚合酶,最优PCR条件可能不同,你需要分别优化。

片段在2000左右,您的意思是还需要摸一下退货温度?
5楼2013-04-03 14:57:31
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

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图片发过来看看,380270985
6楼2013-04-03 16:10:16
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

内容已删除
7楼2013-04-03 16:11:33
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+1, 鼓励应助! 2013-04-04 13:33:29
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-31 23:10:02
引用回帖:
5楼: Originally posted by fuye612 at 2013-04-03 14:57:31
片段在2000左右,您的意思是还需要摸一下退货温度?...

如果你想用pfu扩增的话,是要摸下条件的。2K的片段用taq也不是不行,多送几个克隆测序有正确的就可以了。
8楼2013-04-04 02:41:43
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