24小时热门版块排行榜    

查看: 940  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

fuye612

铜虫 (小有名气)

[求助] 克隆启动子,用TAQ能P出条带,用PFU的时候总是弥散呢?求教于各位大侠!!!

克隆启动子,用TAQ能P出条带,用PFU的时候总是弥散呢?求教于各位大侠!!!
用50ul体系,退火温度比primer 低 3度(提高特异性),所用的酶没有问题。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+1, 鼓励应助! 2013-04-04 13:33:29
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-31 23:10:02
引用回帖:
5楼: Originally posted by fuye612 at 2013-04-03 14:57:31
片段在2000左右,您的意思是还需要摸一下退货温度?...

如果你想用pfu扩增的话,是要摸下条件的。2K的片段用taq也不是不行,多送几个克隆测序有正确的就可以了。
8楼2013-04-04 02:41:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
fuye612(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-31 23:09:44
片段不是太大的话Taq扩增出来可以直接克隆测序。pfu与taq是不同的聚合酶,最优PCR条件可能不同,你需要分别优化。
2楼2013-04-01 23:58:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aga0110125

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
fuye612(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-31 23:09:52
片段长的话,pfu的延伸时间是taq的2X,不能用同一程序扩增
3楼2013-04-02 13:33:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuye612

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by aga0110125 at 2013-04-02 13:33:23
片段长的话,pfu的延伸时间是taq的2X,不能用同一程序扩增

是这么做的。
4楼2013-04-03 14:54:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] FileCode能看出啥? +9 要乐观耀哥 2026-08-10 27/1350 2026-08-13 17:41 by goon12
[基金申请] 静等基金结果 +6 gjjjzhong 2026-08-10 19/950 2026-08-13 17:28 by Tide man
[文学芳草园] 阿姨 +3 汪汪锅 2026-08-09 3/150 2026-08-13 16:56 by 410610288
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +4 majunge000 2026-08-11 6/300 2026-08-13 16:50 by 四季常青藤
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +9 家与远方 2026-08-10 14/700 2026-08-13 09:41 by 臭臭不臭01
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
请填处理意见