24小时热门版块排行榜    

查看: 801  |  回复: 7

fuye612

铜虫 (小有名气)

[求助] 克隆启动子,用TAQ能P出条带,用PFU的时候总是弥散呢?求教于各位大侠!!!

克隆启动子,用TAQ能P出条带,用PFU的时候总是弥散呢?求教于各位大侠!!!
用50ul体系,退火温度比primer 低 3度(提高特异性),所用的酶没有问题。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
fuye612(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-31 23:09:44
片段不是太大的话Taq扩增出来可以直接克隆测序。pfu与taq是不同的聚合酶,最优PCR条件可能不同,你需要分别优化。
2楼2013-04-01 23:58:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aga0110125

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
fuye612(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-31 23:09:52
片段长的话,pfu的延伸时间是taq的2X,不能用同一程序扩增
3楼2013-04-02 13:33:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuye612

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by aga0110125 at 2013-04-02 13:33:23
片段长的话,pfu的延伸时间是taq的2X,不能用同一程序扩增

是这么做的。
4楼2013-04-03 14:54:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuye612

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-01 23:58:31
片段不是太大的话Taq扩增出来可以直接克隆测序。pfu与taq是不同的聚合酶,最优PCR条件可能不同,你需要分别优化。

片段在2000左右,您的意思是还需要摸一下退货温度?
5楼2013-04-03 14:57:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
图片发过来看看,380270985
6楼2013-04-03 16:10:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

内容已删除
7楼2013-04-03 16:11:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+1, 鼓励应助! 2013-04-04 13:33:29
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-31 23:10:02
引用回帖:
5楼: Originally posted by fuye612 at 2013-04-03 14:57:31
片段在2000左右,您的意思是还需要摸一下退货温度?...

如果你想用pfu扩增的话,是要摸下条件的。2K的片段用taq也不是不行,多送几个克隆测序有正确的就可以了。
8楼2013-04-04 02:41:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fuye612 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 297求调剂 +5 田洪有 2026-03-26 5/250 2026-03-26 15:43 by 无际的草原
[考研] 279 分 求调剂 +3 睡个好觉_16 2026-03-24 3/150 2026-03-26 15:43 by zzll406
[考研] 材料与化工考研调剂 +10 孅華 2026-03-22 10/500 2026-03-26 15:40 by zzll406
[考研] 284求调剂 +5 junqihahaha 2026-03-26 5/250 2026-03-26 15:06 by anny19840123
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +13 RichLi_ 2026-03-25 13/650 2026-03-26 14:35 by xiongkun222
[考研] 寻找调剂 +5 倔强芒? 2026-03-21 8/400 2026-03-26 13:25 by 0906ljy
[考研] 08工学调剂 +13 用户573181 2026-03-20 18/900 2026-03-25 22:00 by zbssa
[考研] 材料与化工 322求调剂 +6 然11 2026-03-19 6/300 2026-03-25 18:37 by haxia
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 化学调剂 +6 yzysaa 2026-03-21 6/300 2026-03-25 09:27 by aa331100
[考研] 食品专硕 一志愿双一流 328 +3 xiaom99 2026-03-21 4/200 2026-03-24 21:20 by lailaisimei
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料,材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 7/350 2026-03-24 11:23 by 种大树
[考研] 284求调剂 +3 yanzhixue111 2026-03-23 6/300 2026-03-23 22:58 by pswait
[考研] 一志愿东华大学化学070300,求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 279求调剂 +5 红衣隐官 2026-03-21 5/250 2026-03-21 14:59 by lature00
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见