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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆启动子，用TAQ能P出条带，用PFU的时候总是弥散呢？求教于各位大侠！！！
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fuye612

铜虫 (小有名气)

[求助] 克隆启动子，用TAQ能P出条带，用PFU的时候总是弥散呢？求教于各位大侠！！！

克隆启动子，用TAQ能P出条带，用PFU的时候总是弥散呢？求教于各位大侠！！！
用50ul体系，退火温度比primer 低 3度（提高特异性），所用的酶没有问题。
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1楼 2013-04-01 17:49:28
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
fuye612(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-31 23:09:44
片段不是太大的话Taq扩增出来可以直接克隆测序。pfu与taq是不同的聚合酶，最优PCR条件可能不同，你需要分别优化。
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2楼2013-04-01 23:58:31
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aga0110125

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
fuye612(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-31 23:09:52
片段长的话，pfu的延伸时间是taq的2X，不能用同一程序扩增
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3楼2013-04-02 13:33:23
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fuye612

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by aga0110125 at 2013-04-02 13:33:23
片段长的话，pfu的延伸时间是taq的2X，不能用同一程序扩增

是这么做的。
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4楼2013-04-03 14:54:15
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fuye612

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-01 23:58:31
片段不是太大的话Taq扩增出来可以直接克隆测序。pfu与taq是不同的聚合酶，最优PCR条件可能不同，你需要分别优化。

片段在2000左右，您的意思是还需要摸一下退货温度？
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5楼2013-04-03 14:57:31
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
图片发过来看看，380270985
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6楼2013-04-03 16:10:16
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

内容已删除
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7楼2013-04-03 16:11:33
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-04-04 13:33:29
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-31 23:10:02
引用回帖:
5楼: Originally posted by fuye612 at 2013-04-03 14:57:31
片段在2000左右，您的意思是还需要摸一下退货温度？...

如果你想用pfu扩增的话，是要摸下条件的。2K的片段用taq也不是不行，多送几个克隆测序有正确的就可以了。
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8楼2013-04-04 02:41:43
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