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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 质量控制 » HPLC纯度分析
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wshcf7

金虫 (小有名气)

[求助] HPLC纯度分析

各位老虫，我最近在做一抗体片段的纯度分析（一类新药，没有标准品），参照药典三部上一般运用电泳和分子排阻HPLC法进行分析，电泳法没什么问题，就是在运用液相分析时不是太清楚相关情况，忘有了解的虫友发表下自己的意见，谢谢了！
1. 我们的样品里面有单体、二倍体和多倍体同时存在，实验的目的是要得出单体和二倍体的含量
2.我用常规的缓冲盐溶液进行分析时，根本得不出结果，峰形非常差；而将样品用6M盐酸胍处理后，便能得到理想的峰图和纯度结果

而药典上其他类型的单抗或者重组药物在用分子排阻HPLC法分析纯度时，一般的PBS缓冲液或者PBS含有1%异丙醇即可，。请问将样品用盐酸胍处理后进行HPLC纯度分析的方法是否可行，在进行新药申报时会不会遇到麻烦啊？因为6M盐酸胍时蛋白已经变性了；另外，缓冲盐中加入1%异丙醇的作用是什么，是否会使蛋白变性？
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1楼 2013-03-19 17:32:47
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happyqilu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhychen2008: 金币+1, 多谢参与 2013-03-20 22:50:20
wshcf7: 金币+2, ★有帮助, 是的，Tosoh的柱子有用过，貌似Sepax的柱子耐受性要好一些？ 2013-03-21 13:38:57
曾经看到G3000的柱子说明，可以用尿素等一类的变性剂，但长时间会影响柱效！既然是一类新药，你说了算，你的检测方法就是正宗，呵呵
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3楼2013-03-20 15:13:17
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huwenzhou
4楼2013-03-20 15:40:14
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feng100381

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
变性条件下多倍体不会分开吗？
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蛋白
5楼2013-03-20 16:27:56
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axiao105

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
痴夷子皮: 金币+1, 谢谢交流，欢迎常来哦。 2013-03-21 08:20:21
wshcf7: 金币+2, ★有帮助, 谢谢！多聚体已经控制在5%之内了，通过SDS-PAGE判断的；请问盐酸胍还有可能造成多聚体形成么？不太清楚啊 2013-03-21 13:43:30
怎么确定多聚体不是盐酸胍引起的？
纯化工艺能尽量去掉多聚体么，可能会引起免疫原性
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numb
6楼2013-03-20 17:28:01
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