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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知

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欢仔

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[求助] HPLC-DAD

哪位大侠知道HPLC-DAD的原理，这是什么方法，怎么用，一般用在哪里

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勇于尝试新鲜事物

1楼2011-04-24 21:46:09

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leecius

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【答案】应助回帖

★ ★
novus(金币+2): 说的很详细，希望正是楼主所需！ 2011-05-07 21:03:12
欢仔(金币+3): 谢谢 2011-05-15 12:53:57

楼主想问的应该是紫外单波长检测器（VWD）与紫外二极管阵列检测器（DAD）的使用及区别吧，本人略懂皮毛，简单说一说吧。
1.VWD和DAD两种检测器都属于高效液相色谱仪器的组成部分，只是两者设计有区别，使用有差异而已；
2.VWD只能进行某一特定波长的检测，即事先设定好某一波长，然后在此波长下对流经色谱柱的样品进行检测；DAD检测器可以进行全波长检测，一般是从190nm到400nm的范围扫描，扫描结束后得到一张三维图谱，坐标分别是运行时间、吸收值和波长值，当然你也可以从中调出任何一张波长范围在190nm到400nm的色谱图，此三维图对有关物质检查时的波长选择比较有帮助；
3.关于峰纯度的问题，在DAD检测器上，检查某一色谱峰（A）的峰纯度，首先要对A进行恰当的积分，然后选择合适的参比（分自动和手动，一般选自动，特殊情况下选手动），再选择波长范围（210nm-400nm较合适吧，再低会有基质的末端吸收干扰，会影响峰纯度检查的可信度，当然这要看具体的流动相及等梯度情况啦），之后选择固定阈值（国家局要求在990及以上），最后点一下要测的主峰就可以了。我简单的说一下峰纯度检查的原理吧，是这样的，当要检查某一色谱峰的峰纯度（A）时，软件会在A的起始点、前半中点、顶点、后半中点和结束点（共5点）分别取紫外全扫描图来进行拟合度检查，当拟合度大于阈值（即上述的990）时，软件默认为A的五个点都是一种物质，即A是一种物质的紫外吸收峰，纯的，相反，当拟合度低于阈值时，软件默认A的五个点不是一种物质，即A是两种或两种以上的物质的紫外吸收峰，不纯，就要再进行条件的优化分开它们了。所以峰纯度检查是选择有关物质检查色谱条件的重要环节之一，也就是方法的专属性啦。

上面啰嗦了这么多，希望对大家有帮助吧，如果有不到的地方，希望大家指出更正，谢谢啦！