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卢尔夏

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 如何鉴定一个拟南芥完全未知的基因的功能

这个基因有一些芯片数据和预测数据，突变体也有表型（野生型是Col.0,，渗透处理和低pH处理长的突变体都比野生型差），但是不知道该从哪个方面入手。求大神指导~

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1楼2013-03-19 10:52:13

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zhaolf

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【答案】应助回帖

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卢尔夏: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-04-07 14:27:12
xy656691: 金币+10, 很好 2013-04-08 20:34:58

根据我们实验室的思路，可以做real time PCR或者promoter：GUS看基因在哪些组织和器官表达；可以构建基因：GFP载体转到拟南芥里看蛋白在细胞内的定位，顺便看可不可以complement mutant。如果可以，接下来用该植物提取蛋白，做IP或者克隆该基因通过yeast2hybrid找它的结合蛋白，从这里入手如果找到已知功能的结合蛋白就可以增加该蛋白的信息量了。找到结合蛋白可以通过各种方法来确定结合，然后看结合蛋白被knock out以后植物有没有表型，根据不同的结果再做后续的实验。