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逆境植物

木虫 (正式写手)

[求助] 转基因拟南芥经潮霉素筛选后,移苗成活率低,请指点一下,谢谢。

转基因拟南芥经潮霉素(50 ml MS固体培养基含有50微升潮霉素)筛选后,移苗成活率低,请指点一下,谢谢。

[ Last edited by 逆境植物 on 2012-5-21 at 14:13 ]
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逆境植物学
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seedlingnefu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
逆境植物: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-05-27 09:37:20
jhu132llh: 金币+4, 鼓励新虫积极应助交流 2012-05-27 20:13:24
不清楚你具体的操作方法,但可以给你点建议。(1)在移栽前将培养瓶盖旋松或是将封口膜上的绑绳揭开(封口膜不揭下来)在培养室内锻炼3-4天;(2)组培苗从培养瓶内取出后要小心地把根部附着的培养基清洗干净(否则移栽后容易染菌死亡);(3)移栽后将基径周围的基质压实,并在基质表面和叶面上喷施少量的水,然后将容器口覆上保鲜膜在培养室内培养;(4)每天以喷洒的方式浇水1-2次,每天早晚各揭膜2 min左右通风换气,每隔1周喷施1次0.2%多菌灵溶液;(4)1周后将保鲜膜支起1/4以通风和增加光照,2周后将盒盖支起1/2,4周后将覆盖的薄膜完全撤除。植株长出新的真叶,真叶完全展开后将苗移栽至温室内的容器中。在温室下栽培1~2周后移置室外环境驯化。
6楼2012-05-27 08:19:58
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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by liling77ll at 2012-07-18 15:12:30
我想问问楼主,你筛选的具体方法是什么?可以分享哈不啊?我的也想用潮霉素筛选,但是做了几次没成功,总是被污染,不知道具体哪里的细节处问题了,求指教指教,谢谢!!

被什么污染?农杆菌?
12楼2013-04-26 18:31:13
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普通回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
逆境植物: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-05-23 14:09:03
嗯..................
       你最好等他真叶长出来后再移苗比较好 最好挑那些长根比较长的去移 有些根过短(但还是转基因苗)可能会比较脆弱 从培养基中把苗拉出来时会损伤根部 同时培养基的硬度调低一些 大概0.6%左右 这样既能支撑培养基又能比较轻易的把苗子拽出来 同时你刚移的苗最好保持较高湿度 用覆膜盖上数天存活率会比较高
       个人看法 若有说错请高手指点
Let God do with it as He wills
2楼2012-05-22 23:39:47
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紫叶飘舞

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
逆境植物: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-23 14:09:19
jhu132llh: 金币+4, 鼓励新虫积极应助交流 2012-05-27 20:13:09
可以试试水培法,这样不会造成根部损伤,或者用培养基的话最好浓度低点,达到培养的目的就好,挑取时可以稍微再水浴锅上加热一下
分子生物学
3楼2012-05-23 11:45:45
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Cherimoya

金虫 (正式写手)

基质消毒了么?基质带毒也会导致苗成活率低的
4楼2012-05-23 17:04:11
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逆境植物

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Cherimoya at 2012-05-23 17:04:11:
基质消毒了么?基质带毒也会导致苗成活率低的

都是灭菌之后移苗的。
逆境植物学
5楼2012-05-23 17:42:10
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向日葵me0

铜虫 (初入文坛)

我也遇到了类似的问题,转基因拟南芥经卡那霉素筛选后,培养基上的苗一直长不大,两周了,还是两片子叶,根也长不长,不知道是什么原因,移苗成活率也很低。我用的MS培养基+2%蔗糖+0.7%琼脂+50mg/L看那霉素,PH5.7 。有高人麻烦请指点一下,谢谢啦!
7楼2012-07-12 16:12:42
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liling77ll

银虫 (小有名气)

我想问问楼主,你筛选的具体方法是什么?可以分享哈不啊?我的也想用潮霉素筛选,但是做了几次没成功,总是被污染,不知道具体哪里的细节处问题了,求指教指教,谢谢!!
做最好的自己,和自己的昨天对比
8楼2012-07-18 15:12:30
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小虫子666

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
逆境植物: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-19 20:55:06
我也做的潮霉素筛选我的一些建议:潮霉素抑制根的伸长。 筛选拟南芥时,一定要做对照。一般7-10天后选根长的拟南芥作为移栽对象,苗越大其实越不易成活。移栽后,一定要盖塑料布或者保鲜膜,保湿(浇足水),暗培养1-2d,然后掀去塑料布或者保鲜膜,暗培养1d,逐步光照。
9楼2012-07-18 16:01:04
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yuanuancao

木虫 (小有名气)

潮霉素有滞后性,浓度50mg/l就够了,你浓度加太高
10楼2013-04-25 13:15:48
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