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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 转基因拟南芥经潮霉素筛选后，移苗成活率低，请指点一下，谢谢。
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逆境植物

木虫 (正式写手)

[求助] 转基因拟南芥经潮霉素筛选后，移苗成活率低，请指点一下，谢谢。

转基因拟南芥经潮霉素（50 ml MS固体培养基含有50微升潮霉素）筛选后，移苗成活率低，请指点一下，谢谢。

[ Last edited by 逆境植物 on 2012-5-21 at 14:13 ]
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逆境植物学
1楼2012-05-21 14:11:58
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

seedlingnefu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
逆境植物: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-05-27 09:37:20
jhu132llh: 金币+4, 鼓励新虫积极应助交流 2012-05-27 20:13:24
不清楚你具体的操作方法，但可以给你点建议。（1）在移栽前将培养瓶盖旋松或是将封口膜上的绑绳揭开（封口膜不揭下来）在培养室内锻炼3-4天；（2）组培苗从培养瓶内取出后要小心地把根部附着的培养基清洗干净（否则移栽后容易染菌死亡）；（3）移栽后将基径周围的基质压实，并在基质表面和叶面上喷施少量的水，然后将容器口覆上保鲜膜在培养室内培养；（4）每天以喷洒的方式浇水1-2次，每天早晚各揭膜2 min左右通风换气，每隔1周喷施1次0.2%多菌灵溶液；（4）1周后将保鲜膜支起1/4以通风和增加光照，2周后将盒盖支起1/2，4周后将覆盖的薄膜完全撤除。植株长出新的真叶，真叶完全展开后将苗移栽至温室内的容器中。在温室下栽培1～2周后移置室外环境驯化。
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6楼2012-05-27 08:19:58
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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by liling77ll at 2012-07-18 15:12:30
我想问问楼主，你筛选的具体方法是什么？可以分享哈不啊？我的也想用潮霉素筛选，但是做了几次没成功，总是被污染，不知道具体哪里的细节处问题了，求指教指教，谢谢！！

被什么污染？农杆菌？
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12楼2013-04-26 18:31:13
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普通回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
逆境植物: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-05-23 14:09:03
嗯..................
       你最好等他真叶长出来后再移苗比较好 最好挑那些长根比较长的去移 有些根过短（但还是转基因苗）可能会比较脆弱 从培养基中把苗拉出来时会损伤根部 同时培养基的硬度调低一些 大概0.6%左右 这样既能支撑培养基又能比较轻易的把苗子拽出来 同时你刚移的苗最好保持较高湿度 用覆膜盖上数天存活率会比较高
       个人看法 若有说错请高手指点
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Let God do with it as He wills
2楼2012-05-22 23:39:47
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紫叶飘舞

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
逆境植物: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-23 14:09:19
jhu132llh: 金币+4, 鼓励新虫积极应助交流 2012-05-27 20:13:09
可以试试水培法，这样不会造成根部损伤，或者用培养基的话最好浓度低点，达到培养的目的就好，挑取时可以稍微再水浴锅上加热一下
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分子生物学
3楼2012-05-23 11:45:45
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Cherimoya

金虫 (正式写手)
基质消毒了么？基质带毒也会导致苗成活率低的
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4楼2012-05-23 17:04:11
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逆境植物

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Cherimoya at 2012-05-23 17:04:11:
基质消毒了么？基质带毒也会导致苗成活率低的

都是灭菌之后移苗的。
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逆境植物学
5楼2012-05-23 17:42:10
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向日葵me0

铜虫 (初入文坛)
我也遇到了类似的问题，转基因拟南芥经卡那霉素筛选后，培养基上的苗一直长不大，两周了，还是两片子叶，根也长不长，不知道是什么原因，移苗成活率也很低。我用的MS培养基+2%蔗糖+0.7%琼脂+50mg/L看那霉素，PH5.7 。有高人麻烦请指点一下，谢谢啦！
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7楼2012-07-12 16:12:42
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liling77ll

银虫 (小有名气)
我想问问楼主，你筛选的具体方法是什么？可以分享哈不啊？我的也想用潮霉素筛选，但是做了几次没成功，总是被污染，不知道具体哪里的细节处问题了，求指教指教，谢谢！！
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做最好的自己，和自己的昨天对比
8楼2012-07-18 15:12:30
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小虫子666

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
逆境植物: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-19 20:55:06
我也做的潮霉素筛选我的一些建议：潮霉素抑制根的伸长。 筛选拟南芥时，一定要做对照。一般7-10天后选根长的拟南芥作为移栽对象，苗越大其实越不易成活。移栽后，一定要盖塑料布或者保鲜膜，保湿（浇足水），暗培养1-2d，然后掀去塑料布或者保鲜膜，暗培养1d，逐步光照。
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9楼2012-07-18 16:01:04
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yuanuancao

木虫 (小有名气)
潮霉素有滞后性，浓度50mg/l就够了，你浓度加太高
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10楼2013-04-25 13:15:48
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