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sxbchn

新虫 (初入文坛)

[求助] 用两个DNA片段进行连接,产物用酶切开,大小变了

两个片段均是用NEB的BsaI内切酶消化得到,不过对于两个的末端是否是匹配,目前尚不清楚,正准备送测序。
不管两个末端是否匹配,连接后的产物是能通过抗生素筛选的。
将连接产物提取质粒后,再用BsaI进行酶切,大小却变了。
不知道怎么回事,图片上传不了,我就描述一下吧。
连接的大片段是3kb,小片段是900bp,连接后,提取质粒,再消化,大片段变成了2kb左右,小片段的大小倒是没有变化。
我最费解的就是为什么连接后再酶切,片段的大小竟然变了。
求大神帮忙解答啊!!感激不尽啊!!
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laoguai123

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-03-16 08:06:27
会不会是PH或者是离子浓度变化导致酶识别特异性降低,没具体做过也不是很清楚。如果不是很麻烦的话建议重现一下!
加油,加油...
2楼2013-03-15 19:01:24
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wenzi6337

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 鼓励发帖交流 2013-03-16 08:06:19
是不是没连上,自连的假阳性克隆,大片段两端都是BsaI位点吗?没有更多BsaI位点吗?用PCR先鉴定一下~
3楼2013-03-15 21:35:55
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