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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 多抗制备问题
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87115wh

木虫 (小有名气)

[交流] 多抗制备问题

我想做一个多抗，自己纯化的重组蛋白带有GST标签，但是公司说不负责切标签，如果直接做，可能会有杂带，我想问下影响大吗？我也不知道自己的天然样本中是否含有和GST标签序列一样的蛋白。求各位大侠指点。
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1楼 2013-03-08 09:21:31
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genda_cto

新虫 (初入文坛)
★
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自然是有影响的.GST，一个26KD的蛋白，打到动物体内会产生大量针对GST的抗体。如果你的蛋白里面含有GST标签，那么你制备的抗血清、多抗用什么方法检测，用什么方法纯化？不过这些都可以解决，要纯化出针对你目的蛋白的単特异性多克隆抗体还是办得到的。但下一个问题，你以含有GST的目的蛋白作为免疫原，GST与目的蛋白几乎是等量的，能保证针对目的蛋白的抗体浓度和效价吗？这个就未知了。末了，问题出在哪，也就不得而知。
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6楼2013-03-08 12:41:16
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lihuan0525

金虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
那就用把GST先除去好了，
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2楼2013-03-08 09:32:49
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87115wh

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lihuan0525 at 2013-03-08 09:32:49
那就用把GST先除去好了，

怎么除去，能说的详细一点吗？实验室还没有切GST的酶
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3楼2013-03-08 10:24:29
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lihuan0525

金虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 87115wh at 2013-03-08 10:24:29
怎么除去，能说的详细一点吗？实验室还没有切GST的酶...

用专门出GST标签的一种亲和介质纯化出去啊，
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4楼2013-03-08 10:31:19
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