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87115wh

木虫 (小有名气)


[交流] 多抗制备问题

我想做一个多抗,自己纯化的重组蛋白带有GST标签,但是公司说不负责切标签,如果直接做,可能会有杂带,我想问下影响大吗?我也不知道自己的天然样本中是否含有和GST标签序列一样的蛋白。求各位大侠指点。
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lihuan0525

金虫 (职业作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
那就用把GST先除去好了,
2楼2013-03-08 09:32:49
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87115wh

木虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by lihuan0525 at 2013-03-08 09:32:49
那就用把GST先除去好了,

怎么除去,能说的详细一点吗?实验室还没有切GST的酶
3楼2013-03-08 10:24:29
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lihuan0525

金虫 (职业作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 87115wh at 2013-03-08 10:24:29
怎么除去,能说的详细一点吗?实验室还没有切GST的酶...

用专门出GST标签的一种亲和介质纯化出去啊,
4楼2013-03-08 10:31:19
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无为书生

铁虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你做的是多抗,都是会有交叉反应的。
5楼2013-03-08 10:54:52
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genda_cto

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
自然是有影响的.GST,一个26KD的蛋白,打到动物体内会产生大量针对GST的抗体。如果你的蛋白里面含有GST标签,那么你制备的抗血清、多抗用什么方法检测,用什么方法纯化?不过这些都可以解决,要纯化出针对你目的蛋白的単特异性多克隆抗体还是办得到的。但下一个问题,你以含有GST的目的蛋白作为免疫原,GST与目的蛋白几乎是等量的,能保证针对目的蛋白的抗体浓度和效价吗?这个就未知了。末了,问题出在哪,也就不得而知。
6楼2013-03-08 12:41:16
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87115wh

木虫 (小有名气)


引用回帖:
6楼: Originally posted by genda_cto at 2013-03-08 12:41:16
自然是有影响的.GST,一个26KD的蛋白,打到动物体内会产生大量针对GST的抗体。如果你的蛋白里面含有GST标签,那么你制备的抗血清、多抗用什么方法检测,用什么方法纯化?不过这些都可以解决,要纯化出针对你目的蛋白 ...

汗,仁兄真乃神人也,说的话句句有理就是句句都没用。。
7楼2013-03-08 14:14:24
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genda_cto

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 87115wh at 2013-03-08 14:14:24
汗,仁兄真乃神人也,说的话句句有理就是句句都没用。。...

这些问题我们公司都是可以解决的,鉴于涉及到技术服务的相关技术问题我只能给你提一个方向,具体怎么做就不好直接回答你了。如果一定要用GST标签,建议你切除纯化之后再用做免疫原,不过这个纯化会比较麻烦,而且切除成本很高。建议用His标签。鉴于只做免疫原,不涉及到活性问题,做无标签包涵体也是一个不错的选择。
8楼2013-03-11 10:31:19
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407126867

铁虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by genda_cto at 2013-03-11 10:31:19
这些问题我们公司都是可以解决的,鉴于涉及到技术服务的相关技术问题我只能给你提一个方向,具体怎么做就不好直接回答你了。如果一定要用GST标签,建议你切除纯化之后再用做免疫原,不过这个纯化会比较麻烦,而且 ...

请问您,如果用His标签就不存在这些问题了吗?是His标签去掉比较容易,还是His标签本身不会引起机体产生抗原呢?谢谢,期待您的回复!
9楼2018-12-28 10:53:08
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