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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 多抗制备问题
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87115wh

木虫 (小有名气)

[交流] 多抗制备问题

我想做一个多抗，自己纯化的重组蛋白带有GST标签，但是公司说不负责切标签，如果直接做，可能会有杂带，我想问下影响大吗？我也不知道自己的天然样本中是否含有和GST标签序列一样的蛋白。求各位大侠指点。
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1楼 2013-03-08 09:21:31
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lihuan0525

金虫 (职业作家)
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那就用把GST先除去好了，
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2楼2013-03-08 09:32:49
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87115wh

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lihuan0525 at 2013-03-08 09:32:49
那就用把GST先除去好了，

怎么除去，能说的详细一点吗？实验室还没有切GST的酶
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3楼2013-03-08 10:24:29
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lihuan0525

金虫 (职业作家)
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引用回帖:
3楼: Originally posted by 87115wh at 2013-03-08 10:24:29
怎么除去，能说的详细一点吗？实验室还没有切GST的酶...

用专门出GST标签的一种亲和介质纯化出去啊，
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4楼2013-03-08 10:31:19
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无为书生

铁虫 (小有名气)
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你做的是多抗，都是会有交叉反应的。
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5楼2013-03-08 10:54:52
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genda_cto

新虫 (初入文坛)
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自然是有影响的.GST，一个26KD的蛋白，打到动物体内会产生大量针对GST的抗体。如果你的蛋白里面含有GST标签，那么你制备的抗血清、多抗用什么方法检测，用什么方法纯化？不过这些都可以解决，要纯化出针对你目的蛋白的単特异性多克隆抗体还是办得到的。但下一个问题，你以含有GST的目的蛋白作为免疫原，GST与目的蛋白几乎是等量的，能保证针对目的蛋白的抗体浓度和效价吗？这个就未知了。末了，问题出在哪，也就不得而知。
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6楼2013-03-08 12:41:16
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87115wh

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by genda_cto at 2013-03-08 12:41:16
自然是有影响的.GST，一个26KD的蛋白，打到动物体内会产生大量针对GST的抗体。如果你的蛋白里面含有GST标签，那么你制备的抗血清、多抗用什么方法检测，用什么方法纯化？不过这些都可以解决，要纯化出针对你目的蛋白 ...

汗，仁兄真乃神人也，说的话句句有理就是句句都没用。。
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7楼2013-03-08 14:14:24
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genda_cto

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
7楼: Originally posted by 87115wh at 2013-03-08 14:14:24
汗，仁兄真乃神人也，说的话句句有理就是句句都没用。。...

这些问题我们公司都是可以解决的，鉴于涉及到技术服务的相关技术问题我只能给你提一个方向，具体怎么做就不好直接回答你了。如果一定要用GST标签，建议你切除纯化之后再用做免疫原，不过这个纯化会比较麻烦，而且切除成本很高。建议用His标签。鉴于只做免疫原，不涉及到活性问题，做无标签包涵体也是一个不错的选择。
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8楼2013-03-11 10:31:19
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407126867

铁虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
8楼: Originally posted by genda_cto at 2013-03-11 10:31:19
这些问题我们公司都是可以解决的，鉴于涉及到技术服务的相关技术问题我只能给你提一个方向，具体怎么做就不好直接回答你了。如果一定要用GST标签，建议你切除纯化之后再用做免疫原，不过这个纯化会比较麻烦，而且 ...

请问您，如果用His标签就不存在这些问题了吗？是His标签去掉比较容易，还是His标签本身不会引起机体产生抗原呢？谢谢，期待您的回复！
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9楼2018-12-28 10:53:08
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