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木星海金虫 (正式写手)
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[求助]
如何对植物蛋白去磷酸化？
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检测拟南芥中的一个蛋白，Westernblot显示的信号条带比预期的条带要高10KDa. 我们猜测该蛋白也许被磷酸化了。 求一个去磷酸化的protocol，然后准备把去磷酸化的蛋白重新做一个Westernblot对比一下条带 |
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cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 很专业的回复！ 2013-03-06 15:44:49
木星海: 金币+3, ★★★很有帮助, 我们实验室做过这个蛋白在大肠杆菌里的表达， 跑出来的条带大概在25kDa, 而我从拟南芥中表达的蛋白跑出的条带高10kDa. 计算的分子量也在25kDa, 所以推测是磷酸化导致， 查了一下分子结构，有3-5个可磷酸化的位点。 谢谢回复啦， 查了实验室的酶， 有个fastAP可以用：） 2013-03-10 18:41:30
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yqbter: 金币+2, 很专业的回复！ 2013-03-06 15:44:49
木星海: 金币+3, ★★★很有帮助, 我们实验室做过这个蛋白在大肠杆菌里的表达， 跑出来的条带大概在25kDa, 而我从拟南芥中表达的蛋白跑出的条带高10kDa. 计算的分子量也在25kDa, 所以推测是磷酸化导致， 查了一下分子结构，有3-5个可磷酸化的位点。 谢谢回复啦， 查了实验室的酶， 有个fastAP可以用：） 2013-03-10 18:41:30
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磷酸化一般不会使分子量差10kD，磷酸化影响蛋白的等电点比较大。蛋白电泳观察到的表观分子量与实际分子量有时候会差得比较大，也不一定是就是蛋白修饰。 蛋白样品去磷酸化可以用磷酸酶，很多公司有卖。 |
2楼2013-03-06 07:28:08
3楼2013-03-06 17:59:55
