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tjufyn

金虫 (正式写手)

[求助] 新手关于T细胞培养的问题请教大家

请教各位,

我刚刚接触T细胞培养,细胞样品是冷冻的,从别处一天运来。我解冻后更换了media(成分为RPMI1640+FBS),然后用显微镜数了一下细胞。现在已经过了两天了,media有一些变色的迹象,显微镜下观察细胞数目确实增多了,但是细胞的大小相比刚运来时却小了很多。我的问题是:
(1)请问细胞变小这是不是意味着快死了呢?
(2)有什么方法能分辨细胞死亡或是alive吗?我的方法是先取出微量的细胞溶液然后加入dye,在显微镜下观察细胞内部能够被染色的就是死亡的,不能被染色(透明的)就是alive的。但是目前细胞太小了,实在是不好分辨。请问还有没有别的办法?
(3)我看有人的media了里加了盘尼西林,但是刚解冻的细胞是不是需要缓两天再加抗生素会比较好呢

十分感谢大家
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peakg7

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
tjufyn: 金币+100, ★★★★★最佳答案 2013-03-05 23:54:36
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励积极热心应助 2013-03-06 08:12:18
细胞变小,不是意味着变死,可能是恢复正常状态,t细胞就是很小。如果细胞培养基颜色有变化,更说明是活细胞,只有消耗了营养才会变色。因此不用判断,你的细胞应该是活的好好地。细胞间条件好,规范操作,可以不用加抗生素的,污染的可能性很小的。一开始加抗生素跟到后面再加,应该不会有太大差异。
2楼2013-03-04 14:57:44
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