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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白纯化
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jiapingshk

铜虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化

我用镍柱纯化下来的蛋白在冻融一两次后，大部分蛋白就发生沉淀了，这是为什么？有方法避免吗？
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1楼 2013-03-02 15:21:01
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哆啦B梦1024

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 饼哥 at 2013-04-20 16:24:22
你是不是加了塑化剂？...

没有啊 就是正常的按过镍柱的方法，用的平衡和上样缓冲液是Tris和NaCl ph7.36，洗杂缓冲液里含20mM的咪唑，洗脱缓冲液含200mM的咪唑。没有加其他任何东西……
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13楼2013-04-20 21:23:39
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jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加5-50%的甘油试试。
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静心做事。
2楼2013-03-02 20:52:49
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jiapingshk

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jiangyhai at 2013-03-02 20:52:49
加5-50%的甘油试试。

为什么会沉淀呢？跟咪唑浓度有关吗？
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3楼2013-03-03 09:45:25
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崔士元

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蛋白反复冻融会不会失活？蛋白失活应会沉淀吧
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男人，就要对自己狠一点！
4楼2013-03-03 14:06:18
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