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铁虫 (小有名气)

[求助] 有虫友拿菌液做过Western Blot吗？

本人蛋白为与GST融合表达的蛋白，诱导表达后，跑了SDS-PAGE发现与未诱导的相比，在30KD左右有条带明显加深，与预期分子量相同，初步确定蛋白有表达。现在想做WB做一下进一步确认，可以直接拿全菌与上样缓冲液混合，煮沸裂解，然后做WB吗？可以做的话上样量大概是多少？

1楼 2013-03-01 09:21:17

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铁虫 (小有名气)

引用回帖:

2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-01 11:20:16
可以。上样量要根据你的抗体的效价。一般来说，western blot比考染要灵敏很多。如果你可以从考染看到明显条带，可以稀释一百倍甚至更多。

这样？我还以为要加大上样量的，看来得重新做一次了

3楼2013-03-04 08:39:23

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铁杆木虫 (职业作家)

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joycetoo: 金币+1 2013-03-04 08:38:13

可以。上样量要根据你的抗体的效价。一般来说，western blot比考染要灵敏很多。如果你可以从考染看到明显条带，可以稀释一百倍甚至更多。

2楼2013-03-01 11:20:16

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