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[求助]
菜鸟求助，关于克隆片段的定位 已有1人参与
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老师给的题目是一个基因的部分片段克隆，想以后能纯化出蛋白做抗体。我现在的任务是要找出基因序列，设计引物，克隆，然后放到载体里面就好了。本科毕设。 问题是，那个基因一共转录了15个产物，只有8个protein coding了。只有3个有CCDS区。有CCDS区的那三个重复序列大，氨基酸数相似，围绕的相关研究多。我打算就找前3个重复序列克隆，是否合理呢？ 还有一个问题，因为没有酶切位点，是要PCR的时候P上去，就要设计在引物开头。这样是否会对引物的扩增效率造成影响。 前一个做这个的师兄可能因为引物没设计好，到最后都没能PCR成功。 求大神们指点，第一次完全自己做实验，老师也不怎么管，非常迷茫 |
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