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dorecnu

木虫 (正式写手)

[求助] 挽救一个被错误操作的乙醇沉淀实验

背景:双酶切后准备酚氯仿抽提,乙醇沉淀浓缩DNA.
           样品比较珍贵不能重新制备样品。
错误:忘记了氯仿抽提步骤,在DNA溶液中加入了乙酸钠。
问题:1.加入乙酸钠后是否可重复酚氯仿抽提步骤?
          2.如不能,将错就错,继续乙醇沉淀。大量的蛋白也会被沉淀下来,会不会影响下一步DNA电泳。(制备的DNA准备用于southernblot 实验)

自己想的解决办法:
          1.将已加入乙酸的DNA溶液继续酚氯仿抽提,后乙醇沉淀。
这个方案的风险在于,高盐浓度下酚氯仿抽提会不会DNA也随之被抽走。因为我发现乙酸钠是可以溶解于酚氯仿溶液中的。
           2.将错就错的继续乙醇沉淀后,将乙醇、蛋白沉淀重新溶解于水中。重复酚氯仿抽提乙醇沉淀步骤,重新浓缩DNA。
该方案的风险在于反复沉淀可能造成DNA的大量损失。

请问各位木虫,有没有遇到相似的问题?能否支点招?
在线等!
谢谢大家。

[ Last edited by dorecnu on 2013-1-28 at 16:35 ]
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