应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助关于融合蛋白的linker连接问题
111/2返回列表12下一页
查看: 8093  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wjywen

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助关于融合蛋白的linker连接问题 已有1人参与

各位虫友，大家好！我准备做融合蛋白表达，已经拟定好了linker的序列。但是不知道怎么把linker和连个目的片段连接起来。谢谢大侠指导
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-01-23 20:26:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第一种方法，有限制酶切连接的方法，先把linker设计在A基因的引物上，然后先构建在载体上，然后再把B基因插在linker的后面
第二种方法，做Overlap PCR，先获得A+linker+B的全长序列，然后再构建到载体上
赞一下(2人) 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-01-24 10:21:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PrimerF primerR‘   linker（45bp）   primerF’   PrimerR
primerR‘ primerF’ 和  linker 重叠,PCR连起来就行了
合成6段引物  linker部分直接合出来（你愿意合成超过60bp的大引物直接连起来也行，主要单独合一次linker以后还可以再用）
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2013-01-24 11:48:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果linker不是很长，在引物合成的时候直接合成进去
赞一下 回复此楼
3楼2013-01-24 10:34:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjywen

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gastrodia at 2013-01-24 10:34:09
如果linker不是很长，在引物合成的时候直接合成进去

我准备用15个氨基酸作为linker，不知道需不需要单独合成linker。直接PCR能扩进去吗？如果直接扩，是不是linker中间加酶切位点，分别在两个预联合的片段的引物可加一部分linker序列？谢谢
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-24 11:36:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjywen

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-01-24 10:21:54
第一种方法，有限制酶切连接的方法，先把linker设计在A基因的引物上，然后先构建在载体上，然后再把B基因插在linker的后面
第二种方法，做Overlap PCR，先获得A+linker+B的全长序列，然后再构建到载体上

谢谢
回复此楼
5楼2013-01-24 11:37:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sanmiao

木虫 (正式写手)
请问，你的Linker是什么啊，能否分享下啊，我也在做这个呢，发现不太好设计啊！！！
赞一下 回复此楼
7楼2013-02-21 11:05:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-01-24 10:21:54
第一种方法，有限制酶切连接的方法，先把linker设计在A基因的引物上，然后先构建在载体上，然后再把B基因插在linker的后面
第二种方法，做Overlap PCR，先获得A+linker+B的全长序列，然后再构建到载体上

非常想问一下，如果选用Fc标签构建融合蛋白，那么分泌的融合蛋白都是以二聚体形式吗？会不会影响功能？linker长度？
赞一下 回复此楼
没有人生来洒脱，都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
8楼2014-09-18 10:01:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-01-24 11:48:45
PrimerF primerR‘   linker（45bp）   primerF’   PrimerR
primerR‘ primerF’ 和  linker 重叠,PCR连起来就行了
合成6段引物  linker部分直接合出来（你愿意合成超过60bp的大引物直接连起来也行，主要单独合 ...

非常想问一下，如果选用Fc标签构建融合蛋白，那么分泌的融合蛋白都是以二聚体形式吗？会不会影响功能？linker长度？
赞一下 回复此楼
没有人生来洒脱，都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
9楼2014-09-18 10:02:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小太阳zz

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我的linker也是15个氨基酸，通过overlap将两个蛋白连接起来，但是多次overlap结果都是中间搭桥部分少4个氨基酸，我想知道少这四个氨基酸，会不会对酶有影响
赞一下 回复此楼
走着走着，花就开了
10楼2015-08-24 11:12:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wjywen 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 材料学调剂 +7 提神豆沙包 2026-02-28 9/450 2026-03-01 11:50 by 王伟要上岸啊
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +3 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 6/300 2026-03-01 11:50 by gaoxiaoniuma
[考研] 求调剂 +5 repeatt?t 2026-02-28 5/250 2026-03-01 11:43 by 王伟要上岸啊
[考研] 291分工科求调剂 +7 science饿饿 2026-03-01 8/400 2026-03-01 10:43 by sunny81
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[考研] 0856求调剂285 +6 吕仔龙 2026-02-28 6/300 2026-03-01 10:03 by wang_dand
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 10/500 2026-03-01 10:02 by 科研狗111
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 272求调剂 +4 田智友 2026-02-28 4/200 2026-03-01 06:43 by 刘兵
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 295求调剂 +5 19171856320 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:39 by gaoxiaoniuma
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 4/200 2026-02-28 21:37 by limorning
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[考研] 0856材料求调剂 +10 hyf hyf hyf 2026-02-28 11/550 2026-02-28 18:50 by 无际的草原
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +4 礼堂丁真258 2026-02-28 6/300 2026-02-28 16:18 by 求调剂zz
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭