24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 8252  |  回复: 10

wjywen

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助关于融合蛋白的linker连接问题 已有1人参与

各位虫友,大家好!我准备做融合蛋白表达,已经拟定好了linker的序列。但是不知道怎么把linker和连个目的片段连接起来。谢谢大侠指导
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
第一种方法,有限制酶切连接的方法,先把linker设计在A基因的引物上,然后先构建在载体上,然后再把B基因插在linker的后面
第二种方法,做Overlap PCR,先获得A+linker+B的全长序列,然后再构建到载体上
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-01-24 10:21:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PrimerF primerR‘   linker(45bp)   primerF’   PrimerR
primerR‘ primerF’ 和  linker 重叠,PCR连起来就行了
合成6段引物  linker部分直接合出来(你愿意合成超过60bp的大引物直接连起来也行,主要单独合一次linker以后还可以再用)
6楼2013-01-24 11:48:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果linker不是很长,在引物合成的时候直接合成进去
3楼2013-01-24 10:34:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjywen

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gastrodia at 2013-01-24 10:34:09
如果linker不是很长,在引物合成的时候直接合成进去

我准备用15个氨基酸作为linker,不知道需不需要单独合成linker。直接PCR能扩进去吗?如果直接扩,是不是linker中间加酶切位点,分别在两个预联合的片段的引物可加一部分linker序列?谢谢
4楼2013-01-24 11:36:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjywen

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-01-24 10:21:54
第一种方法,有限制酶切连接的方法,先把linker设计在A基因的引物上,然后先构建在载体上,然后再把B基因插在linker的后面
第二种方法,做Overlap PCR,先获得A+linker+B的全长序列,然后再构建到载体上

谢谢
5楼2013-01-24 11:37:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sanmiao

木虫 (正式写手)

请问,你的Linker是什么啊,能否分享下啊,我也在做这个呢,发现不太好设计啊!!!
7楼2013-02-21 11:05:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-01-24 10:21:54
第一种方法,有限制酶切连接的方法,先把linker设计在A基因的引物上,然后先构建在载体上,然后再把B基因插在linker的后面
第二种方法,做Overlap PCR,先获得A+linker+B的全长序列,然后再构建到载体上

非常想问一下,如果选用Fc标签构建融合蛋白,那么分泌的融合蛋白都是以二聚体形式吗?会不会影响功能?linker长度?
没有人生来洒脱,都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
8楼2014-09-18 10:01:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-01-24 11:48:45
PrimerF primerR‘   linker(45bp)   primerF’   PrimerR
primerR‘ primerF’ 和  linker 重叠,PCR连起来就行了
合成6段引物  linker部分直接合出来(你愿意合成超过60bp的大引物直接连起来也行,主要单独合 ...

非常想问一下,如果选用Fc标签构建融合蛋白,那么分泌的融合蛋白都是以二聚体形式吗?会不会影响功能?linker长度?
没有人生来洒脱,都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
9楼2014-09-18 10:02:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小太阳zz

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我的linker也是15个氨基酸,通过overlap将两个蛋白连接起来,但是多次overlap结果都是中间搭桥部分少4个氨基酸,我想知道少这四个氨基酸,会不会对酶有影响
走着走着,花就开了
10楼2015-08-24 11:12:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wjywen 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿华中农业071010,320求调剂 +4 困困困困坤坤 2026-04-14 5/250 2026-04-14 21:29 by 哆啦A梦只是个梦
[考研] 一志愿鲁东大学071000生物学学硕初试分数276求调剂 +26 慕绝cc 2026-04-09 30/1500 2026-04-14 18:50 by 蔡苏阳
[考研] 271求调剂 +29 2261744733 2026-04-11 29/1450 2026-04-14 16:48 by zhouxiaoyu
[考研] 求调剂 +12 何气正 2026-04-13 13/650 2026-04-14 14:47 by zs92450
[考研] 284求调剂 +17 让我上岸吧阿西 2026-04-09 17/850 2026-04-14 14:44 by 不我拉绿卡
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 一志愿哈工大 085600 277 12材科基求调剂 5+5 chenny174 2026-04-10 37/1850 2026-04-14 07:39 by Abskk
[考研] 332求调剂 +15 蕉蕉123 2026-04-10 15/750 2026-04-13 23:12 by pies112
[考研] 求调剂,985材料与化工348分 +9 涵竹刘 2026-04-11 14/700 2026-04-13 22:26 by 涵竹刘
[考研] 生物学调剂 +11 小冉要努力 2026-04-10 13/650 2026-04-13 11:46 by 电化学及催化
[考研] 一志愿085802 323分求调剂 +13 drizzle_9 2026-04-12 14/700 2026-04-13 10:26 by Faiz5552
[考研] 344 材料专业 求调剂211 无地域要求 +8 hualkop 2026-04-11 8/400 2026-04-12 22:24 by fqwang
[考研] 材料与化工300求调剂 +39 肖开文 2026-04-09 43/2150 2026-04-12 01:30 by 秋豆菜芽
[考研] 280求调剂 +13 wzzz王 2026-04-09 13/650 2026-04-12 00:31 by 勇攀高峰0126
[考研] 288求调剂 +15 代fish 2026-04-09 16/800 2026-04-11 10:26 by wwj2530616
[考研] 0858求调剂 5+5 Gky09300550, 2026-04-10 8/400 2026-04-10 19:13 by chemisry
[考研] 机械专368 有去处吗 +4 种大树 2026-04-10 4/200 2026-04-10 15:31 by jiajinhpu
[考研] 344求调剂 +7 丶风雪夜归人丶 2026-04-09 7/350 2026-04-10 12:05 by pengliang8036
[考研] 085601初试330分找调剂 +10 流心奶黄包l 2026-04-09 10/500 2026-04-10 08:14 by Sammy2
[考研] 332,085601求调剂 +12 ydfyh 2026-04-09 14/700 2026-04-09 17:28 by wp06
信息提示
请填处理意见