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紧急求助！细胞免疫荧光染色失败，细胞、试剂、抗体全换了还是做不出来
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细胞是IMCD3细胞，小鼠肾上皮纤毛细胞。之前从一家国内公司订的细胞，染得出骨架，染不出纤毛。这次换了新细胞，是师兄从进口细胞库订的，培养基是GIBCO的1640. 胰酶也是GIBCO的。一抗是小鼠单抗α-tubulin，染细胞骨架和纤毛；二抗是invitrogen的荧光二抗，红色荧光，goat抗mouse. 我是4%PFA固定15min，20%羊血清室温封闭半小时，一抗过夜，二抗过夜。一抗稀释比例做过1:1000,1:800 protocol推荐1：1000就行。二抗按1:1000做。 染出来在显微镜下面什么都看不到，一片红茫茫的，分不清背景跟细胞。期间一抗换了新的，从PBS、PFA到羊血清全部重新配了，做过37℃快染和过夜慢染，一次结果都没有。好想哭。。。。求大神解救！ |
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