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沙暴我爱罗0

银虫 (小有名气)

[求助] 酵母GS115发酵出现的问题,求指点

酵母GS115发酵木聚糖酶,分批发酵培养基BSM配制过程中因为要调PH,所以加氨水后产生了白色沉淀!但是文献中说的就是要调PH到5.5。
产生了白色沉淀后有许多不利之处。1,检测OD值时,参比液是混浊的,稳定不下来了。2,因为有白色沉淀,所以测定不了细胞干重。3,做镜检的时候,培养基中的沉淀对于观察酵母菌体,也有很大的影响。

要如何处理这个问题了?不管吗?
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nopainsnogains
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wizardfan

至尊木虫 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
沙暴我爱罗0: 金币+1 2013-01-22 11:30:30
氨水也是那个文献上说的试剂?不加氨水前,PH是多少?
2楼2013-01-22 00:58:58
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沙暴我爱罗0

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wizardfan at 2013-01-22 00:58:58
氨水也是那个文献上说的试剂?不加氨水前,PH是多少?

不加氨水前,PH为1.4   氨水是加入发酵罐前加的,是实验室的师兄要求的。
nopainsnogains
3楼2013-01-22 11:13:08
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biolio2009

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
沙暴我爱罗0: 金币+1, 有帮助 2013-01-23 13:30:46
产酸性能太高了 你的菌种  你可以试着流加低浓度的 NaOH  试一试   可以解决 氨水中得氨离子与什么物质结合产生沉淀的问题
4楼2013-01-23 08:54:24
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wxy1989714

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
沙暴我爱罗0: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-01-23 13:30:33
之前有做过两次GS115的发酵,当时上罐时流加氨水调pH至5.0,好像也出现了白色沉淀,当时没管它。一直限制性流加氨水保持pH为5.0。等菌体长起来以后也测过菌液OD和镜检,1,测OD时用的参比液就是单蒸水,2,镜检没看到过白色沉淀。细胞干重没测过,因为我们只要产物,所以做得比较粗放。至于楼上说的用NaOH,是不是需要灭菌才能用。
树叶飞舞,火之意志。
5楼2013-01-23 11:08:29
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biolio2009

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wxy1989714 at 2013-01-23 11:08:29
之前有做过两次GS115的发酵,当时上罐时流加氨水调pH至5.0,好像也出现了白色沉淀,当时没管它。一直限制性流加氨水保持pH为5.0。等菌体长起来以后也测过菌液OD和镜检,1,测OD时用的参比液就是单蒸水,2,镜检没看 ...

用无菌水稀释高浓度的 也行
6楼2013-01-24 09:12:27
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沙暴我爱罗0

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by biolio2009 at 2013-01-23 08:54:24
产酸性能太高了 你的菌种  你可以试着流加低浓度的 NaOH  试一试   可以解决 氨水中得氨离子与什么物质结合产生沉淀的问题

我觉得加 NaOH应该也不行吧,因为Mg2+,Ca2+等因为PH的升高会形成Mg(OH)2等沉淀。
我想,下次再做的时候把PH调成4.5左右,就是不产生沉淀时候的PH值,再来发酵。虽然文献上说应该用PH5.5发酵,你觉得可以吗?
nopainsnogains
7楼2013-01-24 14:06:20
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沙暴我爱罗0

银虫 (小有名气)

★ ★
wizardfan: 金币+2, 鼓励讨论 2013-01-25 07:11:28
引用回帖:
5楼: Originally posted by wxy1989714 at 2013-01-23 11:08:29
之前有做过两次GS115的发酵,当时上罐时流加氨水调pH至5.0,好像也出现了白色沉淀,当时没管它。一直限制性流加氨水保持pH为5.0。等菌体长起来以后也测过菌液OD和镜检,1,测OD时用的参比液就是单蒸水,2,镜检没看 ...

恩,你的建议很有用哦,我镜检看到酵母了。不过之前测OD值时,我一直是先把参比放置半分种左右,再来测的,这样参比的OD就会稳定下来。现在已经诱导了,效果不错,酶活挺好的。
不过我觉得还是要解决培养基沉淀的问题,不然测不了细胞干重。因为我想把东西做好做全。
谢谢你的回复,以后向再向你多多学习。
nopainsnogains
8楼2013-01-24 14:11:36
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wxy1989714

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 沙暴我爱罗0 at 2013-01-24 14:11:36
恩,你的建议很有用哦,我镜检看到酵母了。不过之前测OD值时,我一直是先把参比放置半分种左右,再来测的,这样参比的OD就会稳定下来。现在已经诱导了,效果不错,酶活挺好的。
不过我觉得还是要解决培养基沉淀的 ...

谈不上学习啦,我只做过俩次,以后再做发酵的可能性也不大,只是提供参考咯。呵呵,共同进步咯~~
树叶飞舞,火之意志。
9楼2013-01-25 13:23:13
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