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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酵母GS115发酵出现的问题，求指点
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沙暴我爱罗0

银虫 (小有名气)

[求助] 酵母GS115发酵出现的问题，求指点

酵母GS115发酵木聚糖酶，分批发酵培养基BSM配制过程中因为要调PH，所以加氨水后产生了白色沉淀！但是文献中说的就是要调PH到5.5。
产生了白色沉淀后有许多不利之处。1，检测OD值时，参比液是混浊的，稳定不下来了。2，因为有白色沉淀，所以测定不了细胞干重。3，做镜检的时候，培养基中的沉淀对于观察酵母菌体，也有很大的影响。

要如何处理这个问题了？不管吗？
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nopainsnogains
1楼 2013-01-21 22:04:25
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wizardfan

至尊木虫 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
沙暴我爱罗0: 金币+1 2013-01-22 11:30:30
氨水也是那个文献上说的试剂？不加氨水前，PH是多少？
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2楼2013-01-22 00:58:58
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沙暴我爱罗0

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wizardfan at 2013-01-22 00:58:58
氨水也是那个文献上说的试剂？不加氨水前，PH是多少？

不加氨水前，PH为1.4   氨水是加入发酵罐前加的，是实验室的师兄要求的。
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nopainsnogains
3楼2013-01-22 11:13:08
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biolio2009

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
沙暴我爱罗0: 金币+1, ★有帮助 2013-01-23 13:30:46
产酸性能太高了 你的菌种  你可以试着流加低浓度的 NaOH  试一试   可以解决 氨水中得氨离子与什么物质结合产生沉淀的问题
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4楼2013-01-23 08:54:24
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wxy1989714

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
沙暴我爱罗0: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-01-23 13:30:33
之前有做过两次GS115的发酵，当时上罐时流加氨水调pH至5.0，好像也出现了白色沉淀，当时没管它。一直限制性流加氨水保持pH为5.0。等菌体长起来以后也测过菌液OD和镜检，1，测OD时用的参比液就是单蒸水，2，镜检没看到过白色沉淀。细胞干重没测过，因为我们只要产物，所以做得比较粗放。至于楼上说的用NaOH，是不是需要灭菌才能用。
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树叶飞舞，火之意志。
5楼2013-01-23 11:08:29
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biolio2009

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wxy1989714 at 2013-01-23 11:08:29
之前有做过两次GS115的发酵，当时上罐时流加氨水调pH至5.0，好像也出现了白色沉淀，当时没管它。一直限制性流加氨水保持pH为5.0。等菌体长起来以后也测过菌液OD和镜检，1，测OD时用的参比液就是单蒸水，2，镜检没看 ...

用无菌水稀释高浓度的 也行
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6楼2013-01-24 09:12:27
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沙暴我爱罗0

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by biolio2009 at 2013-01-23 08:54:24
产酸性能太高了 你的菌种  你可以试着流加低浓度的 NaOH  试一试   可以解决 氨水中得氨离子与什么物质结合产生沉淀的问题

我觉得加 NaOH应该也不行吧，因为Mg2+，Ca2+等因为PH的升高会形成Mg（OH）2等沉淀。
我想，下次再做的时候把PH调成4.5左右，就是不产生沉淀时候的PH值，再来发酵。虽然文献上说应该用PH5.5发酵，你觉得可以吗？
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nopainsnogains
7楼2013-01-24 14:06:20
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沙暴我爱罗0

银虫 (小有名气)
★ ★
wizardfan: 金币+2, 鼓励讨论 2013-01-25 07:11:28
引用回帖:
5楼: Originally posted by wxy1989714 at 2013-01-23 11:08:29
之前有做过两次GS115的发酵，当时上罐时流加氨水调pH至5.0，好像也出现了白色沉淀，当时没管它。一直限制性流加氨水保持pH为5.0。等菌体长起来以后也测过菌液OD和镜检，1，测OD时用的参比液就是单蒸水，2，镜检没看 ...

恩，你的建议很有用哦，我镜检看到酵母了。不过之前测OD值时，我一直是先把参比放置半分种左右，再来测的，这样参比的OD就会稳定下来。现在已经诱导了，效果不错，酶活挺好的。
不过我觉得还是要解决培养基沉淀的问题，不然测不了细胞干重。因为我想把东西做好做全。
谢谢你的回复，以后向再向你多多学习。
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nopainsnogains
8楼2013-01-24 14:11:36
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wxy1989714

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 沙暴我爱罗0 at 2013-01-24 14:11:36
恩，你的建议很有用哦，我镜检看到酵母了。不过之前测OD值时，我一直是先把参比放置半分种左右，再来测的，这样参比的OD就会稳定下来。现在已经诱导了，效果不错，酶活挺好的。
不过我觉得还是要解决培养基沉淀的 ...

谈不上学习啦，我只做过俩次，以后再做发酵的可能性也不大，只是提供参考咯。呵呵，共同进步咯~~
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树叶飞舞，火之意志。
9楼2013-01-25 13:23:13
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