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七小艾

新虫 (小有名气)

[求助] 多糖抗氧化测DPPH清除率实验的问题 已有1人参与

今天做了多糖抗氧化测DPPH的实验,问题很多:
1、DPPH用无水乙醇溶的,然后实验出现了絮状沉淀。
2、空白组吸光度超过了1。
3、加了多糖样液的部分样品吸光度超过了空白。

多糖制备的时候是用醇沉的,多糖不溶于醇,DPPH又是用无水乙醇配的,正常情况下是会沉淀的吧???有没有办法解决这些问题呢???求教大神们了,很急啊!!
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学无涯zsp

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


sweety: 金币+1, 应助指数+1 2013-01-26 17:48:30
sweety: 鼓励新虫应助 2013-01-26 17:48:36
引用回帖:
9楼: Originally posted by 七小艾 at 2013-01-23 17:58:42
是的呢,样液在醇里溶解性很差,我试过把糖浓度降到0.4mg/ml,在2ml乙醇里加入200微升糖液也沉淀了。。
看到论坛里有说用CMC乳化剂的,但是找不到相关的文献。。。
还有用DMSO溶解DPPH的,但是那个好像基本是用液 ...

你的样品是用醇沉的,所以我觉得你可能不适合用DPPH这个方法测量,因为DPPH要么用甲醇溶解要么用乙醇溶解来制备,不知道你换成甲醇还会不会出现这个问题。考虑乳化剂是一个解决的办法,我见过的有SDS的,环状糊精的,也有你说的DMSO的,如果还用分光,波光应该还是原来的波长,因为原理是没变的,不放心的话,做个波长扫描就行了,很方便的;另外,你可以考虑看能不能更换样品的溶剂,比如丙酮。如果都不行的话,可以考虑换方法啊,测清除自由基能力的方法很多的,不一定局限于这一种。
10楼2013-01-24 08:39:53
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慧儿

银虫 (小有名气)

絮状沉淀应该是多糖吧,多糖不是水提醇沉么呵呵,空白组超过1,是不是因为你dpph浓度过高呢?加了样品的吸光度超过空白?那可能是你多糖不纯的,是不是里面参杂了别的色素之类东西呢......
做个简单的人,不浮不躁不争不抢!
2楼2013-01-21 09:00:10
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水凝胶

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我也遇到过这事由于糖浓度过高的原因,你把浓度降低就ok啦,
3楼2013-01-21 11:23:46
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七小艾

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 水凝胶 at 2013-01-21 11:23:46
我也遇到过这事由于糖浓度过高的原因,你把浓度降低就ok啦,

低的话有效果吗??因为我做ABTS的时候,浓度达到4mg/ml的时候自由基清除率也才达到50%多一点
4楼2013-01-21 19:37:27
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