| 查看: 1311 | 回复: 37 | ||
[求助]
哪位熟悉枯草杆菌表达系统前辈，来帮忙解决一下小妹的实验啊！做不完怎么过年啊！！！
|
本人做一个大黄欧文菌来源的蔗糖异构酶的表达，这基因已经在大肠杆菌里表达过了，想在枯草杆菌里表达，用的PHY300的穿梭质粒做载体，加了P43的启动子，构建时P43和目的基因之间加入一个酶切位点，现在转化完成，质粒双酶切验证正确。但37度下表达两天后仍测不到酶活，哪位前辈以前做过的，可不可以给指导下我的问题是出在哪了？是本身异源表达有问题，还是载体的问题，还是表达条件的问题？？？马上要放假了，研究生最后一年，不想过年回来还纠结这些实验啊 ……………… |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有244人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
2楼2013-01-16 20:24:29
scienzyme
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 19 (小学生)
- 金币: 13493.4
- 红花: 2
- 帖子: 1600
- 在线: 341.7小时
- 虫号: 137301
- 注册: 2005-12-17
- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2013-01-16 20:35:01
4楼2013-01-17 09:52:57
5楼2013-01-17 13:14:50
6楼2013-01-17 13:35:53
dmzha
铁杆木虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 21 (小学生)
- 金币: 7226.1
- 散金: 650
- 帖子: 238
- 在线: 354.9小时
- 虫号: 808006
- 注册: 2009-07-13
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
7楼2013-01-17 14:49:24
scienzyme
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 19 (小学生)
- 金币: 13493.4
- 红花: 2
- 帖子: 1600
- 在线: 341.7小时
- 虫号: 137301
- 注册: 2005-12-17
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
alice: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢啊！不过我们对枯草的系统真的不了解，身边的人没有很丰富的经验，文章里的信息也不多，您可不可以给提供个更多了解枯草的途径呢？ 2013-01-17 22:01:54
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-01-23 16:05:11
感谢参与，应助指数 +1
alice: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢啊！不过我们对枯草的系统真的不了解，身边的人没有很丰富的经验，文章里的信息也不多，您可不可以给提供个更多了解枯草的途径呢？ 2013-01-17 22:01:54
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-01-23 16:05:11
|
枯草杆菌分泌表达有两种系统，Sec和Tat。nprB信号肽属于Sec系统。Tat分泌系统近年来受到重视，具有一些Sec系统没有的优点。但是无论哪个系统，都不能保证你的目的产物一定能够分泌成功。 遇到分泌失败，首先要检查序列是否正确，有没有破坏阅读框；然后就是换信号肽，Sec系统和Tat系统的信号肽都可以尝试一下。 |
8楼2013-01-17 21:26:11
scienzyme
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 19 (小学生)
- 金币: 13493.4
- 红花: 2
- 帖子: 1600
- 在线: 341.7小时
- 虫号: 137301
- 注册: 2005-12-17
- 专业: 微生物生理与生物化学
9楼2013-01-17 21:36:18
10楼2013-01-17 21:58:23