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Dannel_yan

新虫 (初入文坛)

同时天涯枯草人,我连质粒都没有,麻烦楼主发一份P43的启动子序列给我,我的邮箱是13601540580@163.com,马上就研三了,和楼主一样着急啊。
31楼2013-04-27 21:07:14
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木木祖儿

新虫 (初入文坛)

我也是做枯草的,也是用的P43和NPRB表达抗原片段,但是在构建质粒时一直连不上,请教经验啊!
32楼2013-05-24 15:47:14
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alice

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
31楼: Originally posted by Dannel_yan at 2013-04-27 21:07:14
同时天涯枯草人,我连质粒都没有,麻烦楼主发一份P43的启动子序列给我,我的邮箱是13601540580@163.com,马上就研三了,和楼主一样着急啊。

不好意思啊,早了没有看到,如果还需要一会儿发给你啊
To be strong enough
33楼2013-05-28 09:12:54
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alice

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
32楼: Originally posted by 木木祖儿 at 2013-05-24 15:47:14
我也是做枯草的,也是用的P43和NPRB表达抗原片段,但是在构建质粒时一直连不上,请教经验啊!

你用的什么载体?连接本身就是一个很麻烦的问题,要尽量用穿梭质粒,先在大肠杆菌构建好才利于枯草转化啊!
To be strong enough
34楼2013-05-28 09:14:13
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木木祖儿

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
34楼: Originally posted by alice at 2013-05-28 09:14:13
你用的什么载体?连接本身就是一个很麻烦的问题,要尽量用穿梭质粒,先在大肠杆菌构建好才利于枯草转化啊!...

我用的是PMK3但是一直连不上,在大肠杆菌中得不到阳性质粒,现在构建了一个整合载体,连接还是有问题。
35楼2013-05-28 12:38:36
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alice

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
35楼: Originally posted by 木木祖儿 at 2013-05-28 12:38:36
我用的是PMK3但是一直连不上,在大肠杆菌中得不到阳性质粒,现在构建了一个整合载体,连接还是有问题。...

哦,连接的问题你要做个对照看看了,搞清楚是酶切的问题还是连接体系,连接酶的问题。你连接的片段大吗?有时候一点点的差别结果还是很不一样的。。。
To be strong enough
36楼2013-05-28 13:54:36
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木木祖儿

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
36楼: Originally posted by alice at 2013-05-28 13:54:36
哦,连接的问题你要做个对照看看了,搞清楚是酶切的问题还是连接体系,连接酶的问题。你连接的片段大吗?有时候一点点的差别结果还是很不一样的。。。...

酶切没有问题,片段是2000bp大小的,连接怎么做对照?
37楼2013-05-29 09:55:38
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挖煤工人牛三斤

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by scienzyme at 2013-01-17 21:26:11
枯草杆菌分泌表达有两种系统,Sec和Tat。nprB信号肽属于Sec系统。Tat分泌系统近年来受到重视,具有一些Sec系统没有的优点。但是无论哪个系统,都不能保证你的目的产物一定能够分泌成功。
遇到分泌失败,首先要检查 ...

同学您好啊,我也遇到了和楼主一样的问题,您的意思是一般问题不会出现在在载体身上是么?先不要着急更换载体和启动子,先更换信号肽试试,是么?我的粗酶液也检测了蛋白电泳,但是检测不到目的条带啊
38楼2023-05-30 12:02:00
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