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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 哪位熟悉枯草杆菌表达系统前辈，来帮忙解决一下小妹的实验啊！做不完怎么过年啊！！！
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Dannel_yan

新虫 (初入文坛)
同时天涯枯草人，我连质粒都没有，麻烦楼主发一份P43的启动子序列给我，我的邮箱是13601540580@163.com，马上就研三了，和楼主一样着急啊。
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31楼2013-04-27 21:07:14
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木木祖儿

新虫 (初入文坛)
我也是做枯草的，也是用的P43和NPRB表达抗原片段，但是在构建质粒时一直连不上，请教经验啊！
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32楼2013-05-24 15:47:14
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alice

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
31楼: Originally posted by Dannel_yan at 2013-04-27 21:07:14
同时天涯枯草人，我连质粒都没有，麻烦楼主发一份P43的启动子序列给我，我的邮箱是13601540580@163.com，马上就研三了，和楼主一样着急啊。

不好意思啊，早了没有看到，如果还需要一会儿发给你啊
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To be strong enough
33楼2013-05-28 09:12:54
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alice

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
32楼: Originally posted by 木木祖儿 at 2013-05-24 15:47:14
我也是做枯草的，也是用的P43和NPRB表达抗原片段，但是在构建质粒时一直连不上，请教经验啊！

你用的什么载体？连接本身就是一个很麻烦的问题，要尽量用穿梭质粒，先在大肠杆菌构建好才利于枯草转化啊！
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To be strong enough
34楼2013-05-28 09:14:13
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木木祖儿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
34楼: Originally posted by alice at 2013-05-28 09:14:13
你用的什么载体？连接本身就是一个很麻烦的问题，要尽量用穿梭质粒，先在大肠杆菌构建好才利于枯草转化啊！...

我用的是PMK3但是一直连不上，在大肠杆菌中得不到阳性质粒，现在构建了一个整合载体，连接还是有问题。
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35楼2013-05-28 12:38:36
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alice

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
35楼: Originally posted by 木木祖儿 at 2013-05-28 12:38:36
我用的是PMK3但是一直连不上，在大肠杆菌中得不到阳性质粒，现在构建了一个整合载体，连接还是有问题。...

哦，连接的问题你要做个对照看看了，搞清楚是酶切的问题还是连接体系，连接酶的问题。你连接的片段大吗？有时候一点点的差别结果还是很不一样的。。。
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To be strong enough
36楼2013-05-28 13:54:36
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木木祖儿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
36楼: Originally posted by alice at 2013-05-28 13:54:36
哦，连接的问题你要做个对照看看了，搞清楚是酶切的问题还是连接体系，连接酶的问题。你连接的片段大吗？有时候一点点的差别结果还是很不一样的。。。...

酶切没有问题，片段是2000bp大小的，连接怎么做对照？
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37楼2013-05-29 09:55:38
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挖煤工人牛三斤

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by scienzyme at 2013-01-17 21:26:11
枯草杆菌分泌表达有两种系统，Sec和Tat。nprB信号肽属于Sec系统。Tat分泌系统近年来受到重视，具有一些Sec系统没有的优点。但是无论哪个系统，都不能保证你的目的产物一定能够分泌成功。
遇到分泌失败，首先要检查 ...

同学您好啊，我也遇到了和楼主一样的问题，您的意思是一般问题不会出现在在载体身上是么？先不要着急更换载体和启动子，先更换信号肽试试，是么？我的粗酶液也检测了蛋白电泳，但是检测不到目的条带啊
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38楼2023-05-30 12:02:00
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