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哪位熟悉枯草杆菌表达系统前辈，来帮忙解决一下小妹的实验啊！做不完怎么过年啊！！！
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本人做一个大黄欧文菌来源的蔗糖异构酶的表达，这基因已经在大肠杆菌里表达过了，想在枯草杆菌里表达，用的PHY300的穿梭质粒做载体，加了P43的启动子，构建时P43和目的基因之间加入一个酶切位点，现在转化完成，质粒双酶切验证正确。但37度下表达两天后仍测不到酶活，哪位前辈以前做过的，可不可以给指导下我的问题是出在哪了？是本身异源表达有问题，还是载体的问题，还是表达条件的问题？？？马上要放假了，研究生最后一年，不想过年回来还纠结这些实验啊 ……………… |
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2楼2013-01-16 20:24:29
scienzyme
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7楼2013-01-17 14:49:24
scienzyme
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【答案】应助回帖
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alice: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢啊！不过我们对枯草的系统真的不了解，身边的人没有很丰富的经验，文章里的信息也不多，您可不可以给提供个更多了解枯草的途径呢？ 2013-01-17 22:01:54
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-01-23 16:05:11
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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-01-23 16:05:11
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枯草杆菌分泌表达有两种系统，Sec和Tat。nprB信号肽属于Sec系统。Tat分泌系统近年来受到重视，具有一些Sec系统没有的优点。但是无论哪个系统，都不能保证你的目的产物一定能够分泌成功。 遇到分泌失败，首先要检查序列是否正确，有没有破坏阅读框；然后就是换信号肽，Sec系统和Tat系统的信号肽都可以尝试一下。 |
8楼2013-01-17 21:26:11
scienzyme
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9楼2013-01-17 21:36:18
10楼2013-01-17 21:58:23