【答案】应助回帖

To be strong enough

21楼2013-01-19 09:49:26

dmzha

铁杆木虫 (小有名气)

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19楼: Originally posted by alice at 2013-01-18 11:23:48
对了，枯草的表达要多长时间才能有蛋白表达？...

我不是做这方面的，细菌发酵24h以内就可以吧

22楼2013-01-19 21:16:18

alfdragon

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
alice: 金币+3, ★有帮助, 谢谢！我们目前的条件只能是这样的步骤，每一步都是验证正确后才往下进行的。 2013-01-20 11:45:39
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-01-23 16:05:33

这个很难说的，以前跟导师在哈佛麻省总医院做访问的时候那边的researcher好像做过类似的实验，不过用的载体好像不是你这种。相关文章应该能搜到，做实验不能太sterotype，他们那边用的系统是封闭automic的，你的步骤明显太complex，如果没有条件建议细心重新把每一步重新做一下。

23楼2013-01-20 00:38:47

alfdragon

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★ ★
alice: 金币+2, 谢谢啊，我们的酶活测定过程也是没有问题的，只是有其他方面想请教，您对这方面了解的多吗？ 2013-01-20 11:47:30

刚才说的太simple，步骤太多难免会出现小bug，建议你先看一下是不是因为测酶活性底物失去活性了。

24楼2013-01-20 00:41:20

alice

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引用回帖:

22楼: Originally posted by dmzha at 2013-01-19 21:16:18
我不是做这方面的，细菌发酵24h以内就可以吧...

好的，谢谢了，我再继续努力下

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25楼2013-01-20 11:59:38

weiwei_l

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楼主加油

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26楼2013-01-20 13:26:53

alice

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26楼: Originally posted by weiwei_l at 2013-01-20 13:26:53
楼主加油

嗯，嗯，谢谢啊！

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27楼2013-01-20 14:10:11

alice

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还有没有高人呢？能不能给指导下呢？

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28楼2013-01-23 10:06:57

zd1213

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建议先把构建好的重组质粒拿去测序，确保碱基都是正确的；然后跑SDS-PAGE确认是否有条带；如果仍然不行的话，还有一个办法，就是用RT-PCR确认下转录这一步是否有问题，如果这一步有，SDS没有，那就有可能是翻译的那一步出问题了。可以试试。

29楼2013-01-28 16:31:20

zd1213

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alice: 金币+30, ★★★★★最佳答案, 分析的很全面啊，很有参考价值！会考虑您的建议，进一步验证。谢谢！！！ 2013-01-28 16:46:04

30楼2013-01-28 16:43:04