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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 柱层析问题请教
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ZB镜花水月

铁虫 (初入文坛)

[求助] 柱层析问题请教

请教柱层析的几个问题：
我想分离文冠果壳中的皂苷类物质，采用的是硅胶柱层析分离提取液粗粉。图中是我跑的几个薄层图，图一是甲醇-氯仿1：9、2:8、3:7、4:6、5:5，图二是甲醇-乙酸乙酯1.5:8.5、3:7、4.5:5.5
请问乙酸乙酯和甲醇能否做洗脱剂？我们有压力可达到2mpa的制备色谱仪器，能否直接用薄层的硅胶装柱进行柱层析；从我跑的图来看，选哪种比例的洗脱剂会好些？

甲醇-氯仿.jpg



甲醇-乙酸乙酯.jpg
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1楼 2013-01-16 13:33:20
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hanglin11

木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看起来是CHCl3-CH3OH效果要好些。但是制备柱能不能用CHCl3？
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2楼2013-01-16 13:50:02
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anyluk

主管区长 (文坛精英)

国家高级公共营养师

优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
甲醇-氯仿1：9、2:8、3:7、4:6、5:5，做洗脱剂较好。可以用硅胶做柱层析
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精益求精
3楼2013-01-16 13:52:54
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anyluk

主管区长 (文坛精英)

国家高级公共营养师

优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by ZB镜花水月 at 2013-01-16 14:01:35
谢谢！是要采用硅胶柱的，填料就用做薄层的硅胶可以吗？...

用100-200目的
薄层硅胶太细，你过半月都洗脱不完
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精益求精
6楼2013-01-16 14:53:29
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447834502

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by ZB镜花水月 at 2013-01-16 14:00:25
谢谢您的回复，制备样品量大，不太想用氯仿，想要采用甲醇-乙酸乙酯，不知道合不合适？...

用乙酸乙酯的话拖尾太严重了，看能不能加点酸跑板，可否改善一下？
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7楼2013-01-16 19:34:55
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ldjing

银虫 (正式写手)
都看不怎么清楚，不知道有几个点啊？你的照片显示的是365nm下的图像吧？254的呢？
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8楼2013-01-16 20:15:07
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447834502

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
karl2100: 金币+1, 谢谢参与讨论！ 2013-01-17 00:23:33
引用回帖:
9楼: Originally posted by ZB镜花水月 at 2013-01-16 21:45:13
做柱层析的话，也可以加酸吗？...

我没有做过制备哈，我用过自己装的普通硅胶柱来分离样品的。在那个上面可以用酸，不过都是千分之一、二的样子。至于你的制备柱能不能用酸，我觉得可以查下有关柱子的信息，应该不同的填料，它的PH适应度不同吧
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11楼2013-01-17 00:10:51
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447834502

木虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by ZB镜花水月 at 2013-01-16 21:47:07
就没有分开的点，又不像是拖尾，不知道是否是样品浓度太高？...

用氯仿挺好而用乙酸乙酯不行，应该是溶剂的影响，如果是样品浓度的话，你两个用一个低浓度点半再跑一下试试。
可能是什么质子非质子溶剂的影响吧，这个得查下了
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12楼2013-01-17 00:12:46
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辣笔v小新

荣誉版主 (职业作家)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议：从跑的板看，甲醇-氯仿4:6分离效果挺好...
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自强不息，日新月异
13楼2013-01-17 07:39:38
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ldjing

银虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by ZB镜花水月 at 2013-01-16 21:47:07
就没有分开的点，又不像是拖尾，不知道是否是样品浓度太高？...

你这个应该显示的是物质的荧光吧。。。如果可以的话，你可以试一下三元体系吧。。。比如丙酮：氯仿：石油醚。
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17楼2013-01-17 10:27:17
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兔子少爷

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ZB镜花水月: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-01-17 22:25:04
薄层版上荧光显示一个点，用了显色剂后呢？如果还是一个点，你的目的是不是纯化的？可以显色后再看看有没有其他点，可以换换显色剂试试，甲醇-氯仿1：9、2:8、3:7、4:6系统比较好，用1：9、2:8系统洗脱。
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18楼2013-01-17 10:59:12
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xiaolu8185

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
最好是拿硫酸显下色看看，有没有其它无荧光吸收的成分。现在看的话直接过氯仿：甲醇9:1就挺好了，如果觉得氯仿接触量大可以先用甲醇-乙酸乙酯1.5:8.5过一遍，粗分划段，把这个主斑点冲下来，再拿这一段过氯仿：甲醇9:1。
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19楼2013-01-17 11:20:58
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Zoe150

金虫 (小有名气)
要提取的物质在薄层上面RF在0.2-0.3左右的展开剂最好
有拖尾 加甲酸或者乙酸一两滴 或者加氨水 试试看是否改善
如果效果好 过柱子的时候流动相也要加酸或碱
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20楼2013-01-17 13:15:16
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h_chen

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
ZB镜花水月: 金币+1, ★有帮助 2013-01-17 22:24:18
氯仿甲醇的成点性好，乙酸乙酯甲醇分的不好，
用氯仿甲醇9:1或者8：1试试看
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学生到企业人转变中
21楼2013-01-17 15:03:54
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xiaolu8185

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by ZB镜花水月 at 2013-01-17 15:17:07
嗯，感谢您的回复，我们也决定要先过甲醇-乙酸乙酯，再过氯仿甲醇。但是您为什么觉得氯仿甲醇9：1好呢，它的Rf值是0.2，而8:2和7:3不行吗？他们的Rf值分别是0.38、0.57.
还有甲醇和乙酸乙酯组1.5:8.5的rf 值为0.1 ...

正如20楼的仁兄所言，要提取的物质在薄层上面RF在0.2-0.3左右的展开剂最好，如果是买的高效板RF值就要更小（拿纯的时候刚离开原点的体系都成），否则一上柱子就都冲下来了，达不到分离效果，因为自己装的柱子的柱效要比薄层板差远了。最好不要直接就用铺板子的硅胶，太细，流速慢，吸附也严重，建议粗分可以用100-200目，细分的时候再用细的。用氯仿甲醇的时候柱子透明会很好看。
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27楼2013-01-18 11:04:27
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普通回帖

ZB镜花水月

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hanglin11 at 2013-01-16 13:50:02
看起来是CHCl3-CH3OH效果要好些。但是制备柱能不能用CHCl3？

谢谢您的回复，制备样品量大，不太想用氯仿，想要采用甲醇-乙酸乙酯，不知道合不合适？
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4楼2013-01-16 14:00:25
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ZB镜花水月

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by anyluk at 2013-01-16 13:52:54
甲醇-氯仿1：9、2:8、3:7、4:6、5:5，做洗脱剂较好。可以用硅胶做柱层析

谢谢！是要采用硅胶柱的，填料就用做薄层的硅胶可以吗？
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5楼2013-01-16 14:01:35
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ZB镜花水月

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 447834502 at 2013-01-16 19:34:55
用乙酸乙酯的话拖尾太严重了，看能不能加点酸跑板，可否改善一下？...

做柱层析的话，也可以加酸吗？
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9楼2013-01-16 21:45:13
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ZB镜花水月

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by ldjing at 2013-01-16 20:15:07
都看不怎么清楚，不知道有几个点啊？你的照片显示的是365nm下的图像吧？254的呢？

就没有分开的点，又不像是拖尾，不知道是否是样品浓度太高？
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10楼2013-01-16 21:47:07
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