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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教各位大虾 DGGE电泳图哪个参数要改
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在雨中

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
19楼: Originally posted by 木子勇夏 at 2013-01-16 08:28:44
是真不错啊，图很好看，你们都用银染吗？...

Du-Red核酸染料或者SYBR green I

不用银染，好像很难掌握火候。
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21楼2013-01-16 09:05:24
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在雨中

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
20楼: Originally posted by 木子勇夏 at 2013-01-16 08:31:59
我想问下，这电压跟胶的浓度或者是片段大小之间有个什么样的关系啊，是不是片段大，用的电压就低些，或者是其他的呢？有没有一个规律之类的。新接触这领域，不太懂，请赐教。...

对于特定片段长度的，一般是有比较合适的电压和电泳时间的。大概有个范围。

对于细菌V3 338 518这样的200bp左右的，我们一般是70-80V，12h，或者120V，10h

真菌NS1和Fung扩增大概349bp，我们一般选择100V，12h，或者较高一点电压。不过最好不要太大。

细菌341F与907这种做起来，难度大，不过我们也做的很好，我们一般是140V，16-18h，效果很好。
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22楼2013-01-16 09:08:00
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木子勇夏

新虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 在雨中 at 2013-01-16 09:08:00
对于特定片段长度的，一般是有比较合适的电压和电泳时间的。大概有个范围。

对于细菌V3 338 518这样的200bp左右的，我们一般是70-80V，12h，或者120V，10h

真菌NS1和Fung扩增大概349bp，我们一般选择100V，1 ...

哦，谢谢你这么详细的指教。你们感觉做的挺多的，有没有做过固氮菌的DGGE啊？
我也是用SYBR Green I染色，你的图是反色处理了的是吧？
你说真菌这对引物两处的电压跟时间有点不太一样（70-80v 10-12h and 100v  12h）？
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23楼2013-01-16 16:18:56
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在雨中

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
23楼: Originally posted by 木子勇夏 at 2013-01-16 16:18:56
哦，谢谢你这么详细的指教。你们感觉做的挺多的，有没有做过固氮菌的DGGE啊？
我也是用SYBR Green I染色，你的图是反色处理了的是吧？
你说真菌这对引物两处的电压跟时间有点不太一样（70-80v 10-12h and  ...

固氮菌的没有做过。呵呵


电压和时间都大体有个范围的，在范围内一般都做的很好。你可以使用100v  12h。
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木子勇夏
24楼2013-01-17 09:20:26
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木子勇夏

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
24楼: Originally posted by 在雨中 at 2013-01-17 09:20:26
固氮菌的没有做过。呵呵


电压和时间都大体有个范围的，在范围内一般都做的很好。你可以使用100v  12h。...

哦，谢谢咯.............
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25楼2013-01-18 08:12:11
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