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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教各位大虾 DGGE电泳图哪个参数要改
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木子勇夏

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by xiaowo1127 at 2013-01-10 15:47:43
楼主，你好，我想请教一下，你是做土壤微生物的吗？我是研究这方面的，但是做过很多次，PCR始终不成功，请问楼主能否把你的细菌PCR条件给我看一下呢~~~

细菌的比较容易，你看看这文献可能对你有帮助，我就这么参考的：Characterization of bacterial diversity in two aerated lagoons of a wastewater treatment plant using PCR–DGGE analysis
不过我不用EB染色，对人体伤害太大了。你可以找替代物。
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11楼2013-01-11 08:46:02
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木子勇夏

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by elbo at 2013-01-07 13:02:33
我同学跑土壤真菌 30-50梯度，你看你DGGE图谱中带没跑开，很可能是胶浓度不对

除了胶浓度改变外，其他的条件是：60度/58度，160v   4.5h 8%的胶吗？
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12楼2013-01-11 09:25:55
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elbo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

60度，80V跑上 13个小时看看吧
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13楼2013-01-11 12:56:57
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木子勇夏

新虫 (小有名气)
谢谢。我试试看

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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14楼2013-01-13 11:15:40
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xiaowo1127

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 木子勇夏 at 2013-01-11 08:46:02
细菌的比较容易，你看看这文献可能对你有帮助，我就这么参考的：Characterization of bacterial diversity in two aerated lagoons of a wastewater treatment plant using PCR–DGGE analysis
不过我不用EB染色， ...

谢谢您，我仔细看看，不懂得在请教您~~~
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15楼2013-01-13 16:40:26
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木子勇夏

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by xiaowo1127 at 2013-01-13 16:40:26
谢谢您，我仔细看看，不懂得在请教您~~~...

16楼2013-01-14 08:20:27
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在雨中

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

我做过几次NS1+GC-Fung的DGGE，这个扩增片段是349bp，我们一般是10-50%的梯度。一般是70-80V，10-12h。建议低电压长时间电泳。
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17楼2013-01-15 21:10:47
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在雨中

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
木子勇夏: 金币+1 2013-05-17 15:20:02
引用回帖:
17楼: Originally posted by 在雨中 at 2013-01-15 21:10:47
我做过几次NS1+GC-Fung的DGGE，这个扩增片段是349bp，我们一般是10-50%的梯度。一般是70-80V，10-12h。建议低电压长时间电泳。

给你看看我们实验室刚做的真菌NS1 和Fung引物扩增的真菌PCR产物的DGGE电泳图。不错吧

DGGE.png
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18楼2013-01-15 21:12:44
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木子勇夏

新虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 在雨中 at 2013-01-15 21:12:44
给你看看我们实验室刚做的真菌NS1 和Fung引物扩增的真菌PCR产物的DGGE电泳图。不错吧

DGGE.png
...

是真不错啊，图很好看，你们都用银染吗？
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19楼2013-01-16 08:28:44
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木子勇夏

新虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 在雨中 at 2013-01-15 21:12:44
给你看看我们实验室刚做的真菌NS1 和Fung引物扩增的真菌PCR产物的DGGE电泳图。不错吧

DGGE.png
...

我想问下，这电压跟胶的浓度或者是片段大小之间有个什么样的关系啊，是不是片段大，用的电压就低些，或者是其他的呢？有没有一个规律之类的。新接触这领域，不太懂，请赐教。
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20楼2013-01-16 08:31:59
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