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fdong

新虫 (初入文坛)

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[交流] southern背景太深，怎么办

我用DIG试剂盒（化学显示法）做的，
我的泳道处有很深的背景，连普通marker(非DIG-marker)都能显色出条带。
请大家帮忙给点建议啊：
我的条件如下：
大肠基因组用量5ug,双酶切过夜
探针使用浓度为：25ng/ml
杂交温度50度（CG含量52%，长度900bp)
杂交时间：过夜（约16-18小时）
膜洗涤条件：第一步：2×SSC 0.1%SDS 20度 5分钟两次
第二步：68度 0.5×SSC 0.1%SDS 15分钟两次
其他都按试剂盒使用说明书进行操作。

谢谢了，图片如下：http://pan.baidu.com/share/link? ... ;uk=3774942464

看不到图片可以点这个链接看http://l4.yunpan.cn/lk/QkG4jBcaFBjV5

另外，我转膜用的是bio-rad mini Trans-blot进行的湿法电转膜，用TAE缓冲液，3h, 电压很低20-30V但电流很高400mA，（因为仪器限流，所以电压调不上去）。大家是怎么做的？

[ Last edited by fdong on 2013-1-4 at 18:14 ]

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