应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 生物素标记葡萄糖氧化酶
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
242/3返回列表上一页123下一页
查看: 1466  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

一步一步

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by royhahaha at 2013-02-19 08:36:31
我最后做出来的结果是我所标记的抗体发生非特异性反应了。
不知道因为溶NHS-Biotin用的是DMSO（150微升），最后总的标记混合液体积是5ml左右的缓冲液。
不知道虫友知道为什么是什么导致抗体变性的么？（我的抗体 ...

你的抗体发生非特异性反应指的是什么？？
NHS-Biotin必须用有机试剂溶解的，用DMSO或者DMF都没有问题。单抗或者多抗都不会都什么问题。
你要是说抗体变性，我想问一下，你用DMSO将NHS-Biotin溶解成了多大的浓度啊？？
你能不能把具体步骤发上来看看？？
赞一下 回复此楼
11楼2013-02-19 08:54:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

royhahaha

木虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 一步一步 at 2013-02-19 08:54:19
你的抗体发生非特异性反应指的是什么？？
NHS-Biotin必须用有机试剂溶解的，用DMSO或者DMF都没有问题。单抗或者多抗都不会都什么问题。
你要是说抗体变性，我想问一下，你用DMSO将NHS-Biotin溶解成了多大的浓度啊 ...

我的过程是这样的：
1、先将单抗IgG 5g溶于5ml的 PH7.4的PBS缓冲液
2、称600微克的NHS-Biotin溶于150微升的DMSO中
3、然后在磁力搅拌的条件下，将NHS-Biotin的DMSO溶液加入到5ml的PBS缓冲液中，进行生物素标记反应。
4、反应40-60min后进行透析处理。
如果你有什么好的意见请直接提出来啊。  多谢啦

我说的抗体变性是指：因为标记的是单抗，我们用水、血清、血浆作为样本反应，结果水没反应，血清和血浆都有反应。而抗原是血浆中才有的，血清中基本没有的。故初步判断，是出现了抗体变性。导致了非特异行反应。
赞一下 回复此楼
12楼2013-02-19 16:47:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一步一步

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by royhahaha at 2013-02-19 16:47:37
我的过程是这样的：
1、先将单抗IgG 5g溶于5ml的 PH7.4的PBS缓冲液
2、称600微克的NHS-Biotin溶于150微升的DMSO中
3、然后在磁力搅拌的条件下，将NHS-Biotin的DMSO溶液加入到5ml的PBS缓冲液中，进行生物素标记反 ...

你的那个判断说实话我没有理解。
针对你的步骤我有点疑问：
1. 你的单抗应该是已经纯化得到的对吧？
2. 你的单抗是5克溶于5mlPBS中？抗体浓度是1G/ml？你确定？？
3. 你的生物素浓度是4mg/ml？没错吧？
你先把你的单位解释一下吧，如果是1g/ml的抗体与600ug的生物素反应的话，应该是标记率很低的。如果抗体浓度是1mg/ml的话还可以考虑下。但是建议你把生物素浓度调整至10mg/ml.
赞一下 回复此楼
13楼2013-02-20 08:49:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

royhahaha

木虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 一步一步 at 2013-02-20 08:49:42
你的那个判断说实话我没有理解。
针对你的步骤我有点疑问：
1. 你的单抗应该是已经纯化得到的对吧？
2. 你的单抗是5克溶于5mlPBS中？抗体浓度是1G/ml？你确定？？
3. 你的生物素浓度是4mg/ml？没错吧？
你先把 ...

1、单抗是买国外的，进过纯化的。
2、不好意思，这个抗体单位是输错了。应该是单抗5mg溶于5ml的PBS缓冲液中。 最后抗体溶液是1mg/ml。
3、对的，生物素浓度是4mg/ml（溶于DMSO中）。
赞一下 回复此楼
14楼2013-02-20 10:55:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

royhahaha

木虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 一步一步 at 2013-02-20 08:49:42
你的那个判断说实话我没有理解。
针对你的步骤我有点疑问：
1. 你的单抗应该是已经纯化得到的对吧？
2. 你的单抗是5克溶于5mlPBS中？抗体浓度是1G/ml？你确定？？
3. 你的生物素浓度是4mg/ml？没错吧？
你先把 ...

我们要测定的抗原是在血浆中的，血清中基本不含有的。就像是D-D聚体一样，血浆中含有，血清中没有。
我标记完生物素，就经行了检测，结果血清和血浆都有了反应，就水没有反应。故现在初步判断抗体发生了变性。
赞一下 回复此楼
15楼2013-02-20 11:00:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小乖宝宝

金虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by royhahaha at 2013-02-19 08:36:31
我最后做出来的结果是我所标记的抗体发生非特异性反应了。
不知道因为溶NHS-Biotin用的是DMSO（150微升），最后总的标记混合液体积是5ml左右的缓冲液。
不知道虫友知道为什么是什么导致抗体变性的么？（我的抗体 ...

不好意思，放假回家了。今天才看到。我生物素标记的抗体还不错，特异性蛮明显的。就是生物素与蛋白以分子量1:20标记，透析一天一夜，然后。对了，你抗体透析前有没有除去叠氮化钠
赞一下 回复此楼
16楼2013-02-20 16:36:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一步一步

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by 小小乖宝宝 at 2013-02-20 16:36:57
不好意思，放假回家了。今天才看到。我生物素标记的抗体还不错，特异性蛮明显的。就是生物素与蛋白以分子量1:20标记，透析一天一夜，然后。对了，你抗体透析前有没有除去叠氮化钠...

标记前透析一次就行的，不用提前除去。有的文献中海提到，叠氮化钠在一定浓度（小于等于3mM）下对标记不会有影响的。所以这个应该不是主要问题。当然如果你害怕有影响的话，在标记前多透析下就是了。
赞一下 回复此楼
17楼2013-02-21 08:40:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一步一步

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by royhahaha at 2013-02-20 11:00:03
我们要测定的抗原是在血浆中的，血清中基本不含有的。就像是D-D聚体一样，血浆中含有，血清中没有。
我标记完生物素，就经行了检测，结果血清和血浆都有了反应，就水没有反应。故现在初步判断抗体发生了变性。...

既然水中没有反应，那你为什么不怀疑血清中含有你要测定的抗原呢？？当然血浆中成分可能更复杂，我不是很了解，只是存在这个疑问。
赞一下 回复此楼
18楼2013-02-21 08:42:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

royhahaha

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by 小小乖宝宝 at 2013-02-20 16:36:57
不好意思，放假回家了。今天才看到。我生物素标记的抗体还不错，特异性蛮明显的。就是生物素与蛋白以分子量1:20标记，透析一天一夜，然后。对了，你抗体透析前有没有除去叠氮化钠...

我们买的抗体是固态的。一起来的质检报告里面说明了，里面不含有叠氮钠，只含有少量的NaCl。 所以我在标记前就没有进行透析除叠氮钠的过程了。 直接溶解标记生物素了。
赞一下 回复此楼
19楼2013-02-21 08:48:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

royhahaha

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by 小小乖宝宝 at 2013-02-20 16:36:57
不好意思，放假回家了。今天才看到。我生物素标记的抗体还不错，特异性蛮明显的。就是生物素与蛋白以分子量1:20标记，透析一天一夜，然后。对了，你抗体透析前有没有除去叠氮化钠...

虫友你看我标记的过程有问题么？
能否告知我你的标记过程呢。 可以的话 大谢啊
赞一下 回复此楼
20楼2013-02-21 08:49:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小小乖宝宝 的主题更新
242/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂，262机械专硕 +4 嗯yyl 2026-04-08 4/200 2026-04-08 16:12 by 一只好果子?
[考研] 一志愿深大085601材料工程专业（专硕）300分可以调剂去哪 +12 10160315 2026-04-02 12/600 2026-04-08 11:49 by 猪会飞
[考研] 328求调剂 +13 lftmya 2026-04-07 14/700 2026-04-07 22:45 by JourneyLucky
[基金申请] 请问共同通讯和共同一作的认可度问题 10+5 psa1234 2026-04-01 11/550 2026-04-07 16:57 by caiqing
[考研] 信工所11408 340分 本科西安交大自动化 +3 moontrek 2026-04-06 3/150 2026-04-07 09:56 by chongya
[考研] 08600生物与医药-327 +9 18755400796 2026-04-05 9/450 2026-04-06 22:35 by 52305043001
[考研] 338求调剂 +4 我想上岸ii 2026-04-05 4/200 2026-04-06 21:04 by 木子君1218
[考研] 26自然地理学303分求调剂 +4 一战成硕啊啊啊� 2026-04-06 9/450 2026-04-06 20:35 by lin-da
[考研] 319求调剂 +3 handrui 2026-04-05 3/150 2026-04-06 09:33 by jp9609
[考研] 348求调剂 +6 wukira 2026-04-04 6/300 2026-04-05 18:11 by 猪会飞
[考研] 085600调剂 +9 东照照照 2026-04-04 9/450 2026-04-05 13:44 by ujn_zhuj
[考研] 298分 070300求调剂 +15 zwen03 2026-04-02 15/750 2026-04-05 12:52 by Hdyxbekcb
[考研] 295求调剂 +4 A你好研究生 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:46 by yu221
[考研] 333求调剂 +12 wfh030413@ 2026-04-03 13/650 2026-04-04 21:02 by jj987
[考研] 一志愿华北电力大学（北京），材料科学与工程学硕265，求调剂 +11 yelck 2026-04-03 12/600 2026-04-04 19:52 by dongzh2009
[考研] 调剂 +4 是可乐不是可乐 2026-04-04 4/200 2026-04-04 19:41 by 唐沐儿
[考研] 325求调剂 +4 春风不借意 2026-04-04 4/200 2026-04-04 14:46 by 湘农储能材料
[考研] 22408，264求调剂 +3 ywh729 2026-04-03 4/200 2026-04-04 11:04 by ywh729
[考研] 调剂 +7 祉岷. 2026-04-02 7/350 2026-04-03 09:11 by 花呗还欠600
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-04-02 4/200 2026-04-02 13:03 by yulian1987
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭