10楼: Originally posted by royhahaha at 2013-02-19 08:36:31
我最后做出来的结果是我所标记的抗体发生非特异性反应了。
不知道因为溶NHS-Biotin用的是DMSO（150微升），最后总的标记混合液体积是5ml左右的缓冲液。
不知道虫友知道为什么是什么导致抗体变性的么？（我的抗体 ...

11楼: Originally posted by 一步一步 at 2013-02-19 08:54:19
你的抗体发生非特异性反应指的是什么？？
NHS-Biotin必须用有机试剂溶解的，用DMSO或者DMF都没有问题。单抗或者多抗都不会都什么问题。
你要是说抗体变性，我想问一下，你用DMSO将NHS-Biotin溶解成了多大的浓度啊 ...

12楼: Originally posted by royhahaha at 2013-02-19 16:47:37
我的过程是这样的：
1、先将单抗IgG 5g溶于5ml的 PH7.4的PBS缓冲液
2、称600微克的NHS-Biotin溶于150微升的DMSO中
3、然后在磁力搅拌的条件下，将NHS-Biotin的DMSO溶液加入到5ml的PBS缓冲液中，进行生物素标记反 ...

13楼: Originally posted by 一步一步 at 2013-02-20 08:49:42
你的那个判断说实话我没有理解。
针对你的步骤我有点疑问：
1. 你的单抗应该是已经纯化得到的对吧？
2. 你的单抗是5克溶于5mlPBS中？抗体浓度是1G/ml？你确定？？
3. 你的生物素浓度是4mg/ml？没错吧？
你先把 ...

13楼: Originally posted by 一步一步 at 2013-02-20 08:49:42
你的那个判断说实话我没有理解。
针对你的步骤我有点疑问：
1. 你的单抗应该是已经纯化得到的对吧？
2. 你的单抗是5克溶于5mlPBS中？抗体浓度是1G/ml？你确定？？
3. 你的生物素浓度是4mg/ml？没错吧？
你先把 ...

10楼: Originally posted by royhahaha at 2013-02-19 08:36:31
我最后做出来的结果是我所标记的抗体发生非特异性反应了。
不知道因为溶NHS-Biotin用的是DMSO（150微升），最后总的标记混合液体积是5ml左右的缓冲液。
不知道虫友知道为什么是什么导致抗体变性的么？（我的抗体 ...

16楼: Originally posted by 小小乖宝宝 at 2013-02-20 16:36:57
不好意思，放假回家了。今天才看到。我生物素标记的抗体还不错，特异性蛮明显的。就是生物素与蛋白以分子量1:20标记，透析一天一夜，然后。对了，你抗体透析前有没有除去叠氮化钠...

15楼: Originally posted by royhahaha at 2013-02-20 11:00:03
我们要测定的抗原是在血浆中的，血清中基本不含有的。就像是D-D聚体一样，血浆中含有，血清中没有。
我标记完生物素，就经行了检测，结果血清和血浆都有了反应，就水没有反应。故现在初步判断抗体发生了变性。...

16楼: Originally posted by 小小乖宝宝 at 2013-02-20 16:36:57
不好意思，放假回家了。今天才看到。我生物素标记的抗体还不错，特异性蛮明显的。就是生物素与蛋白以分子量1:20标记，透析一天一夜，然后。对了，你抗体透析前有没有除去叠氮化钠...

16楼: Originally posted by 小小乖宝宝 at 2013-02-20 16:36:57
不好意思，放假回家了。今天才看到。我生物素标记的抗体还不错，特异性蛮明显的。就是生物素与蛋白以分子量1:20标记，透析一天一夜，然后。对了，你抗体透析前有没有除去叠氮化钠...