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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 生物素标记葡萄糖氧化酶
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小小乖宝宝

金虫 (正式写手)

[求助] 生物素标记葡萄糖氧化酶

老板让我标记葡萄糖氧化酶，我生物素标记抗体，效果很好，但不知道为什么一标记葡萄糖氧化酶，酶就失活了，怎么办啊？
还有，刚标记好直接用没问题，但是一放在-20度冰箱，酶就不行了
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1楼 2013-01-03 16:58:04
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的标记量是多少，是一份子酶一份子生物素么
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shine
2楼2013-01-04 16:01:10
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小小乖宝宝

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhang881007 at 2013-01-04 16:01:10
你的标记量是多少，是一份子酶一份子生物素么

不是，是按照分子量1比20标记的
我现在想知道怎么能够去除未标记的生物素啊？
透析几次可以啊？
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3楼2013-01-04 16:47:39
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royhahaha

木虫 (小有名气)
★
wizardfan: 金币+1, 鼓励发帖交流 2013-02-17 09:38:45
我想求助下这位虫友，你生物素标记抗体时怎么标记的？  能否告诉下流程， 最近做了一个生物素标记，标记完后，结果抗体变性了。检测有非特异性反应。 悲剧的很啊
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4楼2013-02-16 11:32:26
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royhahaha

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

能告知在下的话。 不甚感激。
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5楼2013-02-16 11:33:18
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一步一步

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

出去未标记的生物素，直接透析或者用G-25柱过柱即可。
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6楼2013-02-17 17:24:12
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royhahaha

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 一步一步 at 2013-02-17 17:24:12
出去未标记的生物素，直接透析或者用G-25柱过柱即可。

已经经过透析处理了。 透析了1天1液，换透析液5次....难道还透析不干净么？
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7楼2013-02-18 08:29:41
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一步一步

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by royhahaha at 2013-02-18 08:29:41
已经经过透析处理了。 透析了1天1液，换透析液5次....难道还透析不干净么？...

恩，应该差不多了，你透析的时候有没有将透析桶放在磁力搅拌器上搅拌透析？这样可以加快液体之间的交换，加上换液，透析效果会好点。
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8楼2013-02-18 08:44:27
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royhahaha

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 一步一步 at 2013-02-18 08:44:27
恩，应该差不多了，你透析的时候有没有将透析桶放在磁力搅拌器上搅拌透析？这样可以加快液体之间的交换，加上换液，透析效果会好点。...

是的， 一直磁力搅拌的。
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9楼2013-02-19 08:33:27
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royhahaha

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 一步一步 at 2013-02-18 08:44:27
恩，应该差不多了，你透析的时候有没有将透析桶放在磁力搅拌器上搅拌透析？这样可以加快液体之间的交换，加上换液，透析效果会好点。...

我最后做出来的结果是我所标记的抗体发生非特异性反应了。
不知道因为溶NHS-Biotin用的是DMSO（150微升），最后总的标记混合液体积是5ml左右的缓冲液。
不知道虫友知道为什么是什么导致抗体变性的么？（我的抗体是单抗）
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10楼2013-02-19 08:36:31
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