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小小乖宝宝

金虫 (正式写手)

[求助] 生物素标记葡萄糖氧化酶

老板让我标记葡萄糖氧化酶,我生物素标记抗体,效果很好,但不知道为什么一标记葡萄糖氧化酶,酶就失活了,怎么办啊?
还有,刚标记好直接用没问题,但是一放在-20度冰箱,酶就不行了
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的标记量是多少,是一份子酶一份子生物素么
shine
2楼2013-01-04 16:01:10
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小小乖宝宝

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhang881007 at 2013-01-04 16:01:10
你的标记量是多少,是一份子酶一份子生物素么

不是,是按照分子量1比20标记的
我现在想知道怎么能够去除未标记的生物素啊?
透析几次可以啊?
3楼2013-01-04 16:47:39
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royhahaha

木虫 (小有名气)


wizardfan: 金币+1, 鼓励发帖交流 2013-02-17 09:38:45
我想求助下这位虫友,你生物素标记抗体时怎么标记的?  能否告诉下流程, 最近做了一个生物素标记,标记完后,结果抗体变性了。检测有非特异性反应。 悲剧的很啊
4楼2013-02-16 11:32:26
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royhahaha

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

能告知在下的话。 不甚感激。
5楼2013-02-16 11:33:18
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一步一步

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

出去未标记的生物素,直接透析或者用G-25柱过柱即可。
6楼2013-02-17 17:24:12
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royhahaha

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 一步一步 at 2013-02-17 17:24:12
出去未标记的生物素,直接透析或者用G-25柱过柱即可。

已经经过透析处理了。 透析了1天1液,换透析液5次....难道还透析不干净么?
7楼2013-02-18 08:29:41
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一步一步

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by royhahaha at 2013-02-18 08:29:41
已经经过透析处理了。 透析了1天1液,换透析液5次....难道还透析不干净么?...

恩,应该差不多了,你透析的时候有没有将透析桶放在磁力搅拌器上搅拌透析?这样可以加快液体之间的交换,加上换液,透析效果会好点。
8楼2013-02-18 08:44:27
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royhahaha

木虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 一步一步 at 2013-02-18 08:44:27
恩,应该差不多了,你透析的时候有没有将透析桶放在磁力搅拌器上搅拌透析?这样可以加快液体之间的交换,加上换液,透析效果会好点。...

是的, 一直磁力搅拌的。
9楼2013-02-19 08:33:27
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royhahaha

木虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 一步一步 at 2013-02-18 08:44:27
恩,应该差不多了,你透析的时候有没有将透析桶放在磁力搅拌器上搅拌透析?这样可以加快液体之间的交换,加上换液,透析效果会好点。...

我最后做出来的结果是我所标记的抗体发生非特异性反应了。
不知道因为溶NHS-Biotin用的是DMSO(150微升),最后总的标记混合液体积是5ml左右的缓冲液。
不知道虫友知道为什么是什么导致抗体变性的么?(我的抗体是单抗)
10楼2013-02-19 08:36:31
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